"МУК 4.1.2515-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение Агидола-110 в атмосферном воздухе методом жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 20.05.2009)

1. Разработаны ГУ НИИ безопасности жизнедеятельности Республики Башкортостан, г. Уфа; ФГУН УфНИИ медицины труда и экологии человека Роспотребнадзора, г. Уфа; ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН, г. Москва.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 1 от 24 марта 2009 г.).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 20 мая 2009 г.

4. Введены в действие с 1 июня 2009 г.

5. Введены впервые.

1.1. Методические указания по определению концентрации Агидола-110 в атмосферном воздухе методом жидкостной хроматографии предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, а также могут быть использованы санитарными лабораториями промышленных предприятий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды, и другими заинтересованными организациями.

1.2. Методические указания разработаны с целью обеспечения аналитического контроля загрязнения атмосферного воздуха в районах производства и применения алкилфенолов.

1.3. Методические указания аттестованы Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии, Государственным научным метрологическим центром ФГУП "Уральский научно-исследовательский институт метрологии".

2.1. Настоящие Методические указания устанавливают количественный анализ атмосферного воздуха для определения в нем Агидола-110 (пентаэритритовый эфир 3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилпропионовой кислоты) в атмосферном воздухе в диапазоне концентраций 0,5 - 50 мг/куб. м.

2.2. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".

Физико-химические свойства Агидола-110 представлены в табл. 1.

Агидол-110 оказывает слабое раздражающее действие на слизистые оболочки глаз и неповрежденную кожу при длительном контакте. Обладает слабой степенью функциональной кумуляции. По степени воздействия на организм человека относится к 4-му классу опасности (вещества малоопасные). Предельно допустимые максимально разовая и среднесуточная концентрации Агидола-110 в атмосферном воздухе населенных мест составляют 8,0 мг/куб. м и 2,0 мг/куб. м соответственно (ГН 2.1.6.1338-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) загрязняющих веществ в атмосферном воздухе населенных мест" с дополнениями и изменениями).

Значения характеристик погрешности и ее составляющие представлены в табл. 2.

Измерение концентраций Агидола-110 основано на его улавливании из воздуха с концентрированием на фильтре, экстракции ацетонитрилом, упаривании экстракта на ротационном испарителе, анализе на жидкостном хроматографе с УФ-детектором, идентификации по времени удерживания с использованием метода добавок и количественном определении по площадям хроматографических пиков методом абсолютной градуировки.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

Допускается использование других средств измерения, вспомогательного оборудования, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных выше.

7.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88, ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.004-91, ГОСТ 12.4.009-90.

7.2. При выполнении измерений концентраций веществ с использованием жидкостного хроматографа и электроаспиратора следует соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

7.3. Все работы с Агидолом-110 следует проводить в вытяжном шкафу с включенной вентиляцией, избегая попадания его на кожу и в органы дыхания. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

9.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

9.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору и настоящими Методическими указаниями.

Основной раствор Агидола-110. Навеску Агидола-110 массой от 0,1250 г до 0,1500 г взвешивают в бюксе на аналитических весах с точностью до четвертого знака. В бюкс добавляют небольшое количество ацетонитрила, растворяют Агидол-110, количественно переносят в колбу вместимостью 50 куб. см, добавляют ацетонитрил до метки и перемешивают. Концентрацию Агидола-110 (С) рассчитывают по формуле:

Концентрация основного раствора Агидола-110 от 2500 до 3000 мг/куб. дм.

Основной раствор Агидола-110 хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение 6 месяцев.

Градуировочный раствор N 5 с концентрацией 500 мг/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 25 куб. см градуированной пипеткой вместимостью 5 куб. см вносят основной раствор Агидола-110 объемом (V), рассчитанным по формуле (2):

Объем основного раствора Агидола-110 (V) составляет от 4,2 до 5 куб. см. Доводят раствор до метки ацетонитрилом и перемешивают.

Градуировочный раствор N 4 с концентрацией 200 мг/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 25 куб. см градуированной пипеткой вместимостью 10 куб. см вносят градуировочный раствор Агидола-110 N 5 объемом 10 куб. см, доводят раствор до метки ацетонитрилом и перемешивают.

Градуировочный раствор N 3 с концентрацией 100 мг/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 25 куб. см градуированной пипеткой вместимостью 5 куб. см вносят градуировочный раствор Агидола-110 N 5 объемом 5 куб. см, доводят раствор до метки ацетонитрилом и перемешивают.

Градуировочный раствор N 2 с концентрацией 50 мг/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 25 куб. см градуированной пипеткой вместимостью 5 куб. см вносят градуировочный раствор Агидола-110 N 5 объемом 2,5 куб. см, доводят раствор до метки ацетонитрилом и перемешивают.

Градуировочный раствор N 1 с концентрацией 5 мг/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 50 куб. см градуированной пипеткой вместимостью 5 куб. см вносят градуировочный раствор Агидола-110 N 5 объемом 2,5 куб. см, доводят раствор до метки ацетонитрилом и перемешивают.

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентраций Агидола-110 представлены в табл. 3.

Градуировочные растворы хранят в герметичной посуде в холодильнике в течение одного месяца.

Подготовку хроматографа к работе выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации прибора.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

Условия хроматографирования могут быть и другими в зависимости от хроматографа и условий его настройки. Необходимым условием является величина чувствительности системы жидкостного хроматографа, которая должна обеспечивать определение 6 мкг Агидола-110 в растворе ацетонитрила с соотношением сигнал:шум - 3:1.

Определяют время удерживания Агидола-110, шестикратно вводя градуировочный раствор N 4, приготовленный согласно табл. 3. Измеряют в каждом опыте времена удерживания, рассчитывают их среднее значение и доверительные интервалы. Ориентировочное время удерживания Агидола-110 составляет (17,00 +/- 0,51) мин.

Процедуру градуировки хроматографа выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации и руководством пользователя программным обеспечением.

Условия проведения измерений концентраций Агидола-110 в градуировочных растворах должны быть одинаковыми с условиями проведения измерений концентрации Агидола-110 в исследуемых пробах.

Градуировку проводят по методу абсолютной градуировки, используя серию градуировочных растворов с различной концентрацией Агидола-110, начиная с градуировочного раствора с наименьшей концентрацией Агидола-110.

Для градуировки при определении концентраций Агидола-110 в кран-дозатор хроматографа последовательно микрошприцем вместимостью от 50 до 100 куб. мм вводят по 20 куб. мм градуировочных растворов N 1, 2, 3, 4, 5.

Каждый градуировочный раствор хроматографируют 3 - 5 раз для исключения случайных результатов и усреднения данных. Стандартное отклонение времени удерживания не должно превышать 3%, стандартное отклонение площадей пиков не должно превышать 10%. При получении стандартного отклонения времени удерживания и (или) площадей пиков, превышающих указанные значения, проводят повторное хроматографирование градуировочного раствора.

По результатам измерений концентрации Агидола-110 строят градуировочную зависимость, характеризующую соотношение между величиной отклика детектора (площадь пика) и массовой концентрацией Агидола-110 в пробе. Градуировочная зависимость имеет вид:

Градуировочные коэффициенты рассчитываются методом наименьших квадратов согласно Р.50.2.028-2003 "Алгоритмы построения градуировочных характеристик средств измерений состава веществ и материалов и оценивания их погрешностей".

Отбор проб атмосферного воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.3.01-86. Используемые фильтры для отбора пробы Агидола-110 в воздухе должны быть пронумерованы. Порядковый номер наносят карандашом на бумажное кольцо фильтра АФА-ВП-20.

До начала отбора необходимо убедиться в соблюдении ряда требований. Для правильного определения концентрации Агидола-110 при отборе разовых проб воздуха должно выполняться условие изокинетичности, т.е. скорость пропускаемого через фильтр воздуха должна быть равна скорости набегающего потока; выравнивание скоростей осуществляется за счет применения конусных насадок, выбор которых зависит от скорости ветра. Фильтродержатель должен быть ориентирован навстречу ветровому потоку. При суточном отборе пробы Агидола-110 в виде пыли в условиях высокой запыленности масса Агидола-110 на фильтре может превысить его пылеемкость. Предельная пылеемкость фильтра АФА-ВП-20 составляет 5 мг/кв. см (то есть 200 мг на весь фильтр). В таком случае следует переходить к циклическому отбору проб.

На точность определения объема воздуха, прошедшего через поглотительные устройства, влияет нарушение герметичности воздуховодов и фильтродержателя. Проверка состояния системы производится не реже одного раза в месяц. Наиболее вероятно натекание воздуха через фильтродержатель, подводящие резиновые шланги за счет старения резины и появления трещин, соединения резиновых шлангов со штуцерами и поглотительными устройствами. Воздушные коммуникации один раз в месяц очищают от пыли и промывают мыльной водой, чистой водой, затем ацетонитрилом и спиртом. Воздуховод устанавливается только после просушивания. Промытая система перед отбором проб должна быть продута воздухом в течение примерно 20 мин. Колпачок, предохраняющий воздухозаборную трубку от прямого попадания осадков и грязи, промывается один раз в три месяца. Для защиты электроаспираторов от брызг поглотительных и пропитывающих растворов к выходным штуцерам присоединяют патроны, заполненные промытым и высушенным силикагелем с диаметром зерен 0,5 - 4 мм (рис. 1 - не приводится) и ватными тампонами. Проверка градуировки электроаспираторов проводится ежемесячно.

Отбор пробы для определения среднесуточной концентрации Агидола-110 выполняется с расходом 5 куб. дм/мин. циклически по 10 мин. через каждые 3 ч. Параллельно отбирают две пробы. Фильтр с отобранной пробой осторожно вынимают из фильтродержателя, складывают пополам запыленной поверхностью внутрь и помещают последовательно в пакет из кальки и в полиэтиленовый пакет. На пакет шариковой ручкой или фломастером наносят следующие данные: номер пробы, дату и время отбора; расход воздуха и продолжительность отбора пробы по ротаметру; температуру воздуха, проходящего через ротаметр, и атмосферное давление во время отбора пробы.

10.5.1. Фильтр с отобранной пробой помещают в патрон из фильтровальной бумаги, вводят в насадку прибора Сокслета и приливают ацетонитрил до тех пор, пока он не начнет стекать по сифонной трубке в круглодонную колбу. Когда растворитель стечет полностью, добавляют еще некоторое количество ацетонитрила, затем присоединяют обратный холодильник, охлаждаемый водой. Колбу погружают в водяную баню или в лабораторные нагревательные гнезда и нагревают до 85 °С в течение 2 ч.

10.5.2. Экстракт из круглодонной колбы прибора Сокслета переносят в колбу О вместимостью 200 куб. см, ополаскивают круглодонную колбу прибора Сокслета 5 куб. см ацетонитрила и добавляют его в колбу О.

Из экстракта, полученного после пробоподготовки по п. 10.5, микрошприцем вместимостью 100 куб. мм отбирают объем 20 куб. мм и анализируют на хроматографе. Экстракт хроматографируют 3 - 5 раз в условиях повторяемости. Стандартное отклонение времени удерживания не должно превышать 3%, стандартное отклонение площадей пиков не должно превышать 10%. При получении стандартного отклонения времени удерживания и (или) площадей пиков, превышающих указанные значения, проводят повторное хроматографирование экстракта.

Идентификацию Агидола-110 проводят путем сравнения абсолютных времен удерживания в пробах и в стандартных (градуировочных) растворах. При необходимости идентификацию подтверждают методом добавок.

Для того, чтобы убедиться, что все используемые при анализе реагенты и растворители не имеют примесей, мешающих анализу Агидола-110, проводят измерение холостой пробы. Для проведения измерения холостой пробы проводят пробоподготовку по п. 10.5 без отбора проб воздуха и хроматографируют ацетонитрил по п. 10.2. Уровень шума, полученный в холостой пробе, должен быть не более 10% от площадей пиков минимально определяемых массовых концентраций Агидола-110. При несоблюдении этого условия необходимо установить и устранить источник загрязнения. Измерение холостой пробы проводят с каждой новой партией реагентов.

Массовую концентрацию Агидола-110 в атмосферном воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где r - предел повторяемости для двух результатов параллельных определений. Значение предела повторяемости равно 25%.

Результат измерений концентраций Агидола-110 С (мг/куб. м) оформляют протоколом в виде:

где ДЕЛЬТА - абсолютная погрешность измерений: ДЕЛЬТА = 0,01 дельта х С; при доверительной вероятности Р = 0,95 х дельта = +/- 25%;

с указанием даты проведения анализа, места отбора пробы, названия лаборатории, юридического адреса организации, ответственного исполнителя и руководителя лаборатории.

14.1. При необходимости проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят с учетом требований раздела 5.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Расхождение между результатами измерений, полученными двумя лабораториями, не должно превышать предела воспроизводимости (R).

При выполнении этого условия приемлемы оба результата измерения, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значение предела воспроизводимости приведено в табл. 2.

При превышении предела воспроизводимости могут быть использованы методы оценки приемлемости результатов анализа согласно разделу 5 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

14.2. Контроль качества результатов анализа при реализации методики в лаборатории.

Контроль качества результатов анализа при реализации методики в лаборатории предусматривает:

- оперативный контроль процедуры анализа (на основе оценки погрешности при реализации отдельно взятой контрольной процедуры);

- контроль стабильности результатов анализа (на основе контроля стабильности среднеквадратического отклонения внутрилабораторной прецизионности, погрешности).

При невыполнении условия (10) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (10) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

Периодичность оперативного контроля, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов анализа регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.