"МУК 4.1.2546-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств форамсульфурона в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 09.09.2009)

1. Разработаны Всероссийским Научно-исследовательским институтом фитопатологии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.

4. Введены в действие с 1 декабря 2009 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения остаточных количеств форамсульфурона в воде в диапазоне 0,001 - 0,01 мг/куб. дм, в почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, в зеленой массе кукурузы в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг, в зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

Название вещества по ИСО: форамсульфурон.

Название вещества по ИЮПАК: 1-(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-3-[2-(диметилкарбамоил)-5-формамидофенилсульфонил]мочевина.

Структурная формула (не приводится).

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0,02 мг/кг массы тела человека; ПДК в воде водоемов - 0,002 мг/куб. дм; ПДК в почве - 0,02 мг/кг; МДУ в зерне и масле кукурузы - 0,05 мг/кг.

Область применения.

Форамсульфурон - послевсходовый гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. Механизм его действия связан с подавлением синтеза аминокислот с разветвленной цепью (валин и изолейцин), приводящего к прекращению клеточного деления и роста. Он эффективно уничтожает злаковые (Echinochloa cruss-galli, Setaria spp., Elytrigia repens, Sorgum halepense) и широколистные сорные растения в посевах кукурузы. Избирательность действия форамсульфурона в отношении кукурузы обусловлена его быстрой детоксикацией в этой культуре.

Проходит регистрационные испытания в РФ в качестве гербицида в составе смесевых препаратов на посевах зерновых злаков и кукурузы с нормой расхода 40 - 60 г д.в./га.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Методика основана на определении форамсульфурона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Контроль форамсульфурона в образцах осуществляется по содержанию вещества после его экстракции из воды хлористым метиленом, из почвы - смесью ацетонитрила и бикарбоната натрия, из зеленой массы и зерна кукурузы - водным ацетоном, из масла кукурузы - ацетонитрилом, очистки экстракта путем распределения действующего вещества между несмешивающимися растворителями при щелочном и кислом значениях pH и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора колонки, состава подвижной фазы и условий хроматографирования.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими веществами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.

7.1.2. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3. Очистка н-гексана. Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.4. Очистка хлористого метилена. Хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, 2% раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

7.1.5. Очистка силикагеля. Силикагель 60 (0,063 - 0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °C в течение 5 ч.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 кап./сек., после чего она готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора форамсульфурона с концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле (п. 7.9.2). Раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.5. Промывают колонку 50 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 кап./сек., элюат отбрасывают. Затем колонку промывают.

100 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему). Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 2 куб. см подвижной фазы, подготовленной по п. 7.7, перемешивают и анализируют на содержание форамсульфурона по п. 9.4. Фракции, содержащие форамсульфурон, объединяют и вновь анализируют по п. 9.4. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Профиль вымывания форамсульфурона может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 400 куб. см ацетонитрила, доливают до метки 0,005 М водным раствором ортофосфорной кислоты (п. 7.2), перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.

Промывают колонку подвижной фазой, приготовленной по п. 7.7, при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии.

7.9.1. Исходный раствор форамсульфурона для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,010 г форамсульфурона, растворяют в 40 - 50 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.

7.9.2. Раствор форамсульфурона N 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора форамсульфурона с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.9.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.

Для приготовления проб масла с внесением при оценке полноты извлечения форамсульфурона из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор форамсульфурона с концентрацией 5 мкг/куб. см.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.

7.9.3. Рабочие растворы N 2 - 5 форамсульфурона для градуировки (концентрация 0,02 - 0,20 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора N 1 форамсульфурона с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.9.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.7, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией форамсульфурона 0,02; 0,04; 0,10 и 0,20 мкг/куб. см соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ x сек.) от концентрации форамсульфурона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 7.9.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", 26950-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ Р 50436-92 "Зерновые. Отбор проб зерна".

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °C не более 2 недель.

Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C не более 4 недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре -18 °C.

Пробы зеленой массы кукурузы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при -18 °C.

Пробы зерна высушивают до стандартной влажности и хранят в холодильнике при температуре 4 °C.

Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4 - 6 °C. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, образцы почвы просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, зерно размалывают на мельнице, а зеленую массу измельчают ножом.

9.1.5. Масло. Образец масла массой 5 г вносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 10 куб. см гексана и перемешивают. К раствору добавляют 50 куб. см ацетонитрила и содержимое интенсивно встряхивают в течение 30 мин. Верхний ацетонитрильный слой собирают после разделения фаз в делительной воронке вместимостью 250 куб. см. Операцию экстракции масляной фазы повторяют еще два раза, используя по 30 куб. см ацетонитрила.

Экстракт, полученный по пп. 9.1.2, 9.1.3, 9.1.4 и 9.1.5, переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения органическую фазу отбрасывают, а водную фракцию еще дважды обрабатывают хлористым метиленом порциями по 15 куб. см. Водную фракцию переносят в химический стакан, подкисляют 2 М ортофосфорной кислотой до pH 3, контролируя кислотность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев органическую фазу фильтруют через 1 слой хлопковой ваты в мерный цилиндр вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 15 куб. см хлористого метилена. Измеряют объем объединенной органической фазы и часть ее, эквивалентную 1 г зерна, масла и зеленой массы либо 2 г почвы, переносят в круглодонную колбу вместимостью 25 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.

Сухой остаток в колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.5. Колбу обмывают 2 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку последовательно промывают 45 куб. см смеси ацетон-метанол (8:2, по объему) и 10 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему) со скоростью 1 - 2 кап./сек., элюат отбрасывают. Форамсульфурон элюируют с колонки 60 куб. см смеси ацетон-метанол (7:3, по объему), элюат собирают в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Сухой остаток экстрактов почвы, зерна и масла растворяют в 1 куб. см, зеленой массы - в 2,5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по п. 7.7, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание форамсульфурона по п. 9.4.

Жидкостной хроматограф с программным обеспечением Breeze фирмы Waters (США) с ультрафиолетовым детектором, модель 2487.

Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасфер 110-С18, зернением 6 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота (40:60).

Скорость потока элюента: 0,5 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 250 нм.

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.

Время удерживания форамсульфурона: 6,2 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2,0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

Содержание форамсульфурона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае, если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения"

< 0,001 мг/куб. дм <*> для воды, < 0,01 мг/кг <**> для почвы, < 0,05 мг/кг <***> для зеленой массы кукурузы, < 0,02 мг/кг <****> для зерна и масла кукурузы.

--------------------------------

<*> 0,00 мг/куб. дм - предел обнаружения для воды.

<**> 0,01 мг/кг - предел обнаружения для почвы.

<***> 0,05 мг/кг - предел обнаружения для зеленой массы кукурузы.

<****> 0,02 мг/кг - предел обнаружения для зерна и масла кукурузы.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

ВНИИ фитопатологии.