"МУК 4.1.2273-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фосэтил алюминия в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 24.09.2007)

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии (Л.В. Дубовая, А.М. Макеев).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21.06.2007).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г.

4. Введены в действие с 10 декабря 2007 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации фосэтил алюминия в ягодах и соке винограда в диапазоне 0,4 - 4,0 мг/кг.

Название по ИСО: Фосэтил алюминий.

Название по ИЮПАК: Этилгидрофосфонат алюминия.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 3,0 мг/кг/сутки;

МДУ в винограде - 0,8 мг/кг.

Область применения

Фосэтил алюминий - системный фунгицид защитного и искореняющего действия. Высокоэффективен против возбудителей болезней плодовых, овощных и декоративных культур и виноградной лозы, вызываемых грибами из класса Phycomycetes. Вещество ингибирует прорастание спор или подавляет развитие мицелия и споруляцию. Проявляет также активность против некоторых бактериальных патогенов растений. Применяется в России в качестве фунгицида на огурцах открытого грунта, луке и винограде с нормой расхода до 2 кг д.в./га и трехкратной обработкой за сезон.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД). Контроль фосэтил алюминия в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из ягод водным метанолом и последующей дериватизации диазометаном. Виноградный сок анализируют после разбавления водой. Идентификация проводится по времени удерживания пика вещества, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры колонки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 + 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

7.1.1. Очистка диэтилового эфира

Растворитель предварительно встряхивают со свежеприготовленным раствором железного купороса, а затем последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Перегнанный эфир хранят над гидроксидом калия.

7.2.1. Приготовление 40%-ного водного раствора гидроксида калия

Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

В химический стакан вместимостью 250 куб. см помещают 40 г гидроксида калия, приливают 60 куб. см дистиллированной воды и осторожно перемешивают до полного растворения осадка.

7.2.2. Приготовление 1%-ного раствора серной кислоты

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 50 - 60 куб. см дистиллированной воды, вносят 1,05 куб. см концентрированной серной кислоты, перемешивают, доводят водой до метки и вновь перемешивают.

7.2.3. Приготовление эфирного раствора диазометана

Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

В двугорлой круглодонной колбе вместимостью 100 куб. см, снабженной капельной воронкой, растворяют 5 г N-метил-N-нитрозо-п-толуолсульфонамида в 30 куб. см смеси диэтилового эфира и метанола (1:1, по, объему). Колбу присоединяют к холодильнику, нижний конец которого снабжен аллонжем с отводом, погруженным в слой эфира (100 куб. см) в приемной колбе, охлаждаемой смесью льда и соли. В воронку помещают 15 куб. см 40%-ного раствора гидроксида калия. Реакцию начинают добавлением в реакционный сосуд раствора гидроксида калия по каплям, избегая бурного вскипания реакционной массы. Об окончании реакции судят по прекращению выделения диазометана в диэтиловый эфир. Раствор диазометана хранят в колбе с притертой пробкой в холодильнике не более пяти дней.

Капиллярную кварцевую колонку ZB-50 (типа OV-17) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 270 °С и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов.

7.4.1. Исходный раствор фосэтил алюминия для градуировки (концентрация 1 мг/куб. см).

В мерную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 0,052 г аналитического стандарта фосэтил алюминия, растворяют в 40 куб. см дистиллированной воды, доводят объем раствора этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике не более 3-х месяцев.

7.4.2. Раствор фосэтил алюминия N 1 для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см).

Для приготовления проб ягод и сока с внесением при оценке полноты извлечения фосэтил алюминия из исследуемых образцов используют водный раствор с концентрацией 10 мкг/куб. см.

Градуировочный раствор N 1 и водный раствор фосэтил алюминия хранятся в холодильнике в течение месяца.

7.4.3. Приготовление градуировочных растворов метильного производного фосэтил алюминия.

Стандартные растворы метильного производного фосэтил алюминия используют для построения градуировочного графика. В грушевидную колбу вместимостью 50 куб. см отбирают 1 куб. см градуировочного раствора N 1, приливают 7 куб. см эфирного раствора диазометана (п. 7.2.3) и колбу закрывают пробкой. Колбу периодически встряхивают. Через 15 минут к раствору в колбе приливают 1 куб. см изопропанола и содержимое упаривают на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С до объема 2 - 3 куб. см. Раствор метильного производного фосэтил алюминия переносят в мерную колбу вместимостью 50 куб. см. Грушевидную колбу обмывают трижды порциями по 10 куб. см изопропанола, которые также переносят в мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят изопропанолом до метки и получают градуировочный раствор N 2 с концентрацией 2,0 мкг/куб. см (по кислоте). Из него последовательным разбавлением в изопропаноле готовят рабочие растворы для градуировки с концентрациями (по кислоте): 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/куб. см.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х с) от концентрации фосэтил алюминия в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 рабочим растворам метильного производного вещества для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого рабочего градуировочного раствора (п. 7.4.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТом 25896-83 "Виноград свежий столовый".

Пробы ягод анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше -18 °С.

9.1.1. Ягоды. Образец растительного материала массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 80 куб. см смеси метанол - вода (1:1, по объему) и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Суспензию центрифугируют при 6000 g в течение 5 минут. Надосадочную жидкость декантируют через бумажный фильтр в конусной воронке в мерный цилиндр. Остаток повторно гомогенизируют с 30 куб. см смеси метанол - вода (1:1) в течение 1 мин. Суспензию центрифугируют при 6000 g в течение 3 минут и надосадочную жидкость фильтруют в этот же мерный цилиндр. Измеряют объем раствора, отбирают 1/40 объема этой фракции (эквивалентна 0,5 г образца) и переносят в грушевидную колбу вместимостью 50 куб. см. Далее проводят метилирование экстракта по п. 9.2.

9.1.2. Сок. К образцу сока массой 20 г приливают 20 куб. см дистиллированной воды, перемешивают. Отбирают 1/40 объема раствора (эквивалентна 0,5 г образца) и переносят в грушевидную колбу вместимостью 50 куб. см. Далее проводят метилирование по п. 9.2.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-50 (типа OV-17), длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, фирма Phenomenex (США).

Температура термостата испарителя - 230 °С, детектора - 300 °С, термостата колонки (программа: от 85 °С (3 мин.) со скоростью 2°/мин. до 100 °С (0 мин.); со скоростью 25°/мин. до 260 °С (5 мин.)

Расход газов: газа-носителя (азот) - 3,1 куб. см/мин.; водорода и воздуха к ТИД - 11,2 и 200 куб. см/мин. соответственно.

Деление потока: 1:2.

Время удерживания метального производного фосэтил алюминия: 5 мин. 00 сек. - 5 мин. 05 сек.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования: 0,05 - 1,0 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика метального производного фосэтил алюминия.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют изопропанолом.

Содержание фосэтил алюминия рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" менее 0,4 мг/кг для ягод и сока винограда <*>.

--------------------------------

<*> 0,4 мг/кг - предел обнаружения для ягод и сока винограда.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Дубовая Л.В., науч. сотр.; Макеев А.М., зав. лаб., канд. биол. наук.

ГНУ ВНИИ фитопатологии, 143050, Моск. обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.