"МУК 4.1.2464-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пиноксадена в воде, пиноксадена и его основных метаболитов в почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.02.2009)

1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4. Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации пиноксадена в воде в диапазоне 0,0005 - 0,01 мг/куб. дм; пиноксадена и его основных метаболитов в почве в диапазоне 0,1 - 2,0 мг/кг.

Пиноксаден (NOA 407855)

2,2-Диметилпропионовая кислота, 8-(2,6-диэтил-4-метилфенил)-9-оксо-1,2,4,5тетрагидро-9Н-пиразоло[1,2-d][1,4,5]оксадиазепин-7-ил эфир (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Основными продуктами метаболитической деградации пиноксадена в почве (гидролиз, фото- и биотрансформация) являются соответствующий дион - метаболит 2 (здесь и далее - М2) и 8гидрокси-дион - метаболит 3 (здесь и далее - М3).

Краткая токсикологическая характеристика

Метаболит 2 (М2, NOA 407854)

8-(2,6-диэтил-4-метил-фенил)-тетрагидропиразоло[1,2-d][1,4,5] оксадиазепин-7,9-дион (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Область применения препарата

Пиноксаден рекомендуется в качестве высокоэффективного селективного послевсходового гербицида для подавления роста широкого спектра злаковых сорняков на посевах ячменя, пшеницы, ржи и тритикале.

Рекомендуемые гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов - 0,01 мг/куб. дм, ОДК в почве - 0,2 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Обучение работников соблюдению безопасности условий труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7.1.1. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. Ацетон. Растворитель сушат над молекулярными ситами 4 А и подвергают фракционной перегонке на ректификационной колонне, целиком собранной из стекла, с числом теоретических тарелок не менее 30. До начала отбора главной фракции приемник несколько раз промывают дистиллятом. Перегонку продолжают до тех пор, пока в сосуде для перегонки не останется приблизительно 100 куб. см ацетона. Температуру водяной бани следует снижать по мере уменьшения объема ацетона, во всех случаях она не должна превышать температуру кипения ацетона (56 °С) более чем на 20 °С.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 192,1 г лимонной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 40 г гидроксида натрия, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 38,45 г лимонной кислоты, 5 г хлорида натрия и 4,2 г гидроксида натрия, доводят объем раствора до метки деионизованной водой, перемешивают. Контролируют pH раствора с помощью pH-метра, при необходимости доводят его значение до 3-х добавлением 1 М раствора гидроксида натрия или лимонной кислоты.

В коническую колбу вместимостью 100 куб. см помещают 150 куб. см деионизованной воды и 50 куб. см метанола, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 300 куб. см ацетона и 200 куб. см 0,2 М цитратного буферного раствора (pH 3), перемешивают.

--------------------------------

<*> В отсутствии специального аллонжа, жидкость продавливают через патрон с помощью медицинского шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 1 - 2 капли в секунду.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 250 куб. см деионизованной воды, 1 куб. см муравьиной кислоты, 750 куб. см метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 400 куб. см деионизованной воды, 1 куб. см муравьиной кислоты, 600 куб. см метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.8 или 7.9) при скорости подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

7.11.1. Исходные растворы пиноксадена, метаболитов М2 и М3 для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,0100 г пиноксадена (метаболита М2 или М3), добавляют 50 - 70 куб. см метанола, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают. Растворы хранятся в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

7.11.2. Растворы N 1 пиноксадена и метаболитов М2 и М3 для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора пиноксадена (метаболитов М2 или М3) с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.11.1), разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Растворы хранятся в холодильнике в течение месяца.

Растворы пиноксадена, метаболитов М2 и М3 с концентрацией 10 мкг/куб. см используют для приготовления проб воды и почвы с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.11.3. Рабочие растворы N 2 - 6 пиноксадена, метаболитов М2 и М3 для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/куб. см). В 5 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.11.2), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 7.5, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией пиноксадена (метаболитов М2 или М3) 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 7-ми дней.

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации пиноксадена (метаболитов М2 или М3) в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1 или 9.3.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °С.

Образцы почвы подсушивают в темноте до постоянного веса, помещают в герметичную тару и хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре не более недели.

Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Перед анализом воду фильтруют через неплотный бумажный фильтр, почву - просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм.

9.1.1. Определение пиноксадена. Образец отфильтрованной воды объемом 200 куб. см помещают в химический стакан вместимостью 400 куб. см, с помощью медицинского шприца (или разряжения, создаваемого водоструйным насосом) пробу наносят на концентрирующий патрон Sep Pak Plus C18, подготовленный по п. 7.14, со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в секунду. После завершения концентрирования пробы патрон промывают 5 куб. м смеси вода - метанол (9:1, по объему), затем 10 куб. см этой же смеси в соотношении 1:1 (по объему), пропуская растворитель до нижнего края сорбента, элюат отбрасывают. Патрон освобождают от следов влаги (осушают) с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом. Действующее вещество элюируют с патрона 5 куб. см метанола, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 20 - 25 куб. см, упаривают досуха, остаток растворяют в 0,5 см метанола (помещая на ультразвуковую баню на 20 - 30 с), вносят 1,5 см деионизованной воды, вновь помещают на ультразвуковую баню на 20 - 30 с и анализируют содержание пиноксадена по п. 9.3.1.

9.2.1. Экстракция. Образец суховоздушной почвы массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см смеси для экстракции, приготовленной по п. 7.6, и встряхивают на механическом встряхивателе 45 мин.

Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента". Аликвоту отфильтрованного экстракта объемом 5 куб. см (1/10 часть экстракта, эквивалентная 1 г почвы) переносят в коническую колбу или стакан вместимостью 100 куб. см и подвергают очистке по п. 9.2.2.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостный хроматограф "Perkin Elmer" (США) с ультрафиолетовым детектором

Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Spherisorb(R) S5 ODS 2, зернением 5 мкм

9.3.1. Определение пиноксадена

9.3.2. Определение метаболитов М2 и М3

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочные растворы с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют смесью растворителей, приготовленной по п. 7.5 (не более чем в 50 раз).

Содержание пиноксадена в пробе (X, мг/куб. дм) рассчитывают по формуле:

где:

A - концентрации пиноксадена, найденная по градуировочному графику, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

W - объем анализируемого образца, куб. см.

Содержание пиноксадена в пробе с учетом его основных метаболитов М2 и М3 в эквиваленте действующего вещества (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где:

Б, В - концентрации метаболитов М2 и М3 соответственно, найденные по градуировочным графикам, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г.

C = 10 с учетом объема экстракта, взятого для анализа.

К1, К2 - коэффициенты пересчета содержания метаболита М2 и М3 на эквивалент пиноксадена по соотношению молекулярных масс (равны 1,266 и 1,205 соответственно).

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе воды менее 0,0005 мг/куб. дм, почвы - менее 0,1 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,0005 мг/куб. дм и 0,1 мг/кг - пределы обнаружения в воде и почве соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненными в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Роспотребнадзор.