"МУК 4.1.2590-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств хлорантранилипрола в воде, почве, клубнях картофеля, яблоках и яблочном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 26.03.2010)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 03.12.2009 N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 26 марта 2010 г.

4. Введены в действие с 26 марта 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации хлорантранилипрола в воде в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/л; в почве, клубнях картофеля, яблоках и яблочном соке в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: хлорантранилипрол.

Название по ИЮПАК: 3-бром-4'-хлор-1-(3-хлор-2-пиридил)-2'-метил-6'-(метилкарбамоил)пиразол-5-карбоксанилид.

Структурная формула (не приводится).

Растворимость в воде при pH 4 - 0,972; при pH 7 - 0,88; при pH 9 - 0,971 (все в мг/куб. дм).

Растворимость в органических растворителях: в ацетоне - 3446, в метаноле - 1714, в этилацетате - 1144, в ацетонитриле - 710 (все в мг/куб. дм).

В Российской Федерации установлены следующие гигиенические нормативы:

ПДК в воде - 0,2 мг/куб. дм;

ОДК в почве - 0,2 мг/кг;

МДУ в яблоках - 0,5 и клубнях картофеля - 0,1 мг/кг.

Хлорантранилипрол - инсектицид кишечного действия, нарушающий баланс кальция в миофибриллах мускулов насекомых. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов чешуекрылых, жесткокрылых (колорадский жук), двукрылых (минеры).

Применяется для борьбы с грызущими насекомыми с нормой расхода 0,01 - 0,06 кг д.в. на га в зависимости от культуры в посадках картофеля, винограда, яблоневых садах.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении хлорантранилипрола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после его извлечения из почвы, клубней картофеля, яблок этилацетатом, из яблочного сока ацетонитрилом, переэкстракции в диэтиловый эфир с последующим превращением хлорантранилипрола в его основной метаболит IN-EQW78. Из воды хлорантранилипрол извлекают диэтиловым эфиром.

Идентификация проводится по времени удерживания IN-EQW78. Количественное определение - методом абсолютной калибровки в пересчете на хлорантранилипрол.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-88, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7.1.1. Приготовление стандартных растворов

100 мг хлорантранилипрола (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют навеску в ацетоне на УЗВ и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике не более 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 ацетоном готовят стандартный раствор N 2 с концентрацией 10,0 мкг/куб. см, который может храниться в холодильнике не более 30 суток.

Из стандартного раствора N 2 путем последовательного разбавления готовят рабочие растворы для дериватизации с концентрациями: 0,2; 0,4; 1,0; 2,0 мкг/куб. см, которые также используются для внесения в матрицу при отработке и апробации методики. Растворы можно хранить в холодильнике не более 5 суток.

7.1.2. Приготовление 1,0% водного раствора аммиака для дериватизации

Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

В мерную колбу объемом 25 куб. см осторожно приливают 1 куб. см аммиака к дистиллированной воде. Перемешивают раствор и доводят объем до метки водой. Полученный раствор хранят под тягой в течение одного месяца.

7.1.3. Приготовление раствора 4н водного раствора серной кислоты

Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

В мерную колбу объемом 1 куб. дм осторожно приливают 112 куб. см концентрированной серной кислоты к дистиллированной воде. Осторожно перемешивают раствор, добавляют воды, но не до метки. Когда раствор остынет, его доводят водой до метки.

К сухому остатку в виале добавляют 0,4 мл ацетонитрила и растворяют остаток на УЗВ 2 мин. В виалу добавляют 1 мл 1,0%-го водного раствора аммиака и перемешивают содержимое на УЗВ еще 2 мин. Плотно (!) закрывают виалу пробкой и помещают в блок для виал, нагретый до 75 °C. Виалу выдерживают в блоке в течение 2 ч. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 мл этилацетата и интенсивно встряхивают смесь. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя аликвоту 5 куб. см переносят в концентратор и выпаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетона. Полученный раствор хроматографируют.

Для установления градуировочной характеристики отбирают по 1 куб. см каждого рабочего раствора для дериватизации в отдельные виалы (раздел 7.1.1), удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию, как указано в разделе 7.2. Получают 4 раствора для градуировки с концентрациями: 0,1; 0,05; 0,02; 0,01 мкг/куб. см в пересчете на хлорантранилипрол.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации хлорантранилипрола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.7. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.1979, а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 659-79 "Соки плодовые и ягодные натуральные. ТУ", ГОСТ 7176-85 "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ", ГОСТ 26832-86 "Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ", ГОСТ 27572-87 "Яблоки свежие для промышленной переработки. ТУ".

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.

Для подготовки проб почвы к длительному хранению почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы клубней картофеля и яблок хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C до 2 лет. Перед анализом яблоки и клубни картофеля размораживают и измельчают на терке.

Пробы яблочного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 5 суток.

Пробу воды объемом 100 куб. см переносят в делительную воронку, подкисляют 4н водным раствором серной кислоты до pH 2 (около 2 куб. см), добавляют 50 куб. см диэтилового эфира и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. Осторожно! Кипит!

После полного разделения слоев нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний эфирный собирают в концентратор емкостью 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Повторяют экстракцию еще дважды, используя каждый раз по 30 куб. см диэтилового эфира. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток переносят тремя порциями по 2 куб. см ацетона в виалу и проводят дериватизацию по п. 7.2. После дериватизации аликвоту 2 куб. см этилацетата из виалы переносят в концентратор и выпаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток в концентраторе разводят в 10 куб. см ацетона и аликвоту 1 куб. мм вводят в хроматограф.

9.2.1. Экстракция

Навеску 10 г почвы помещают в центрифужную полипропиленовую банку объемом 250 куб. см и смачивают ее 10 куб. см дистиллированной воды. К навеске добавляют 50 куб. см этилацетата и встряхивают смесь на встряхивателе 45 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин. при 4000 об./мин. и фильтруют полученный экстракт методом декантации через фильтр "красная лента" в концентратор емкостью 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см этилацетата, встряхивая смесь каждый раз по 30 мин. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не выше 35 °C.

9.2.2. Очистка экстракта

К остатку в концентраторе добавляют двумя порциями 100 мл воды, ополаскивают стенки концентратора и переносят водную фазу в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Водную фазу подкисляют 4н серной кислотой до pH 2 (около 2 куб. см), добавляют 50 куб. см диэтилового эфира и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. Осторожно! Кипит!

После полного разделения слоев нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний эфирный собирают в концентратор емкостью 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Повторяют экстракцию еще дважды, используя каждый раз по 30 куб. см диэтилового эфира. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток переносят тремя порциями по 2 куб. см ацетона в виалу и проводят дериватизацию по п. 7.2. После дериватизации аликвоту 5 куб. см этилацетата из виалы переносят в концентратор и выпаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток в концентраторе разводят в 10 куб. см ацетона и аликвоту 1 куб. мм вводят в хроматограф.

9.4.1. Экстракция

Навеску (10 г) измельченных клубней картофеля помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см этилацетата и встряхивают смесь на встряхивателе 45 мин. Фильтруют полученный экстракт методом декантации через фильтр "красная лента" в концентратор емкостью 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см этилацетата, встряхивая смесь каждый раз по 30 мин. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Далее проводят очистку экстракта, как описано в п. 9.2.2.

9.5.1. Экстракция

Навеску (10 г) измельченных яблок помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см этилацетата и встряхивают смесь на встряхивателе 45 мин. Фильтруют полученный экстракт методом декантации через фильтр "красная лента" в концентратор емкостью 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 30 куб. см этилацетата, встряхивая смесь каждый раз по 30 мин. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Далее проводят очистку экстракта, как описано в п. 9.2.2.

9.6.1. Экстракция

Навеску (10 г) сока разводят 20 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и помещают в полипропиленовую банку. К навеске добавляют 40 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе 20 мин. Затем экстракт переносят в делительную воронку и после полного разделения слоев нижний водный слой собирают в ту же полипропиленовую банку, а верхний ацетонитрильный собирают в концентратор емкостью 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 40 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 20 мин. Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Далее проводят очистку экстракта, как описано в п. 9.2.2.

Хроматограф газовый HP 6890 Series, GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД), в модификации с электронным управлением пневматической системы (ЭУПС).

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rxi-5ms (5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 320 °C, поток обдува анода (азот) - 6,0 мл/мин., поток поддува - 58,5 мл/мин.

Температура испарителя - 300 °C, тип газа гелий, режим Split, давление 24,5 psi, деление потока 20:1, split поток 30,0 мл/мин.

Программированный нагрев колонки с 180 °C (выдержка 1 мин.) по 25 град./мин. до 270 °C, с 270 °C по 5 град./мин. до 300 °C (выдержка 10 мин.), режим постоянный поток, поток колонки 1,5 мл/мин., средняя скорость 40 см/с.

Абсолютное время удерживания IN-EQW78 - 14,036 мин. +/- 3%.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 - 0,1 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор IN-EQW78 с концентрацией 0,1 мкг/мл в пересчете на хлорантранилипрол, соответственно разбавляют.

Количественное определение хлорантранилипрола проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов IN-EQW78 с концентрацией 0,01 - 0,1 мкг/куб. см в пересчете на хлорантранилипрол.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа HP GC ChemStation Rev. A.06.03RUS.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание хлорантранилипрола рассчитывают по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг" <*>

--------------------------------

<*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):