"МУК 4.1.2371-08. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств диметахлора в воде, почве, семенах, масле рапса и основных его метаболитов - метансульфоната и оксаламовой кислоты в воде и почве хроматографическими методами. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 16.06.2008)

1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 апреля 2008 г. N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 16 июня 2008 г.

4. Введены в действие с 5 сентября 2008 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств диметахлора в воде, почве, семенах и масле рапса в диапазонах 0,005 - 0,05 мг/куб. дм; 0,025 - 0,25 мг/кг; 0,01 - 0,1 мг/кг и 0,01 - 0,1 мг/кг соответственно, а также метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения его основных метаболитов - метансульфоната и оксаламовой кислоты в воде и почве в диапазонах 0,005 - 0,05 мг/куб. дм и 0,025 - 0,25 мг/кг соответственно.

Диметахлор (CGA 17020)

2-хлор-N-(2-метоксиэтил)ацет-2',6'-ксилидид (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса 255,8.

Твердый (кристаллический) порошок без цвета и запаха. Давление паров - 1,5 мПа (при 25 °С). Плотность 1,23 (при 22 °С). Температура кипения ~ 320 °С. Растворимость в воде - 2,3 г/куб. дм (pH 4 - 10, при 25 °С). Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 25 °С): октанол - 440, ацетон > 500, толуол > 500, гексан - 42, этилацетат > 500, метанол > 500, дихлорметан > 500. Гидролитически стабилен при pH 5, 7 и 9 (DT50 > 200 дней).

Краткая токсикологическая характеристика:

Основными продуктами метаболизма диметахлора в воде и почве являются метансульфонат и оксаламовая кислота.

Метансульфонат диметахлора (CGA 354742)

[N-(2,6-диметилфенил)-N-(2-метоксиэтил)карбамоил]метансульфонат натрия (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса 323,4.

Оксаламовая кислота диметахлора (CGA 50266)

N-(2,6-диметилфенил)-N-(2-метоксиэтил)оксаминовая кислота (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса 251,3.

Область применения:

Диметахлор - высокоэффективный почвенный гербицид, применяемый для подавления широкого спектра однолетних злаковых и двудольных сорняков на масличном рапсе.

Рекомендуемые гигиенические нормативы:

ПДК в воде водоемов - 0,01 мг/куб. дм (органолепт.).

ОДК в почве - 0,07 мг/кг.

МДУ в семенах и масле рапса - 0,01 мг/кг.

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Методика основана на определении диметахлора с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным или масс-селективным детектором (ЭЗД/МСД) после экстракции из анализируемых проб семян и масла рапса ацетонитрилом, почвы - смесью метанол - вода при кипячении, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с флорисилом. Остаточные количества метансульфоната и оксаламовой кислоты определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции метансульфоната из образцов почвы - смесью метанол - вода при кипячении, оксаламовой кислоты - последовательно водой, затем разбавленной серной кислотой, очистки экстрактов на концентрирующих патронах Sep Pak Plus C18.

Для концентрирования и очистки проб воды использованы патроны Sep Pak Plus C18.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочных характеристик, подготовка колонки с флорисилом и концентрирующих патронов для очистки экстрактов, проверка хроматографического поведения диметахлора на колонке.

7.1.1. Очистка гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.2. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.3. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

В мерную колбу вместимостью 250 куб. см помещают 28 г гидроксида калия, растворяют в 100 - 150 куб. см деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,1 г марганцовокислого калия, растворяют в 50 - 70 куб. см деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 400 - 500 куб. см деионизованной воды, вносят 5,6 куб. см концентрированной серной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 87,75 г хлорида натрия, растворяют в 500 - 700 куб. см деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 3,85 г ацетата аммония, растворяют в 500 - 700 куб. см деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 820 куб. см 0,05 М раствора ацетата аммония, добавляют 1 куб. см ортофосфорной кислоты и 180 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.7) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 1000 куб. см 0,05 М раствора ацетата аммония, добавляют 6,5 куб. см ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.10.1. Исходный раствор диметахлора для градуировки (концентрация 250 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,025 г диметахлора, растворяют в 50 - 60 куб. см этилацетата, доводят этилацетатом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

7.10.2. Раствор N 1 диметахлора для градуировки (концентрация 25 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора диметахлора с концентрацией 250 мкг/куб. см (п. 7.10.1), разбавляют гексаном до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

7.10.3. Рабочие растворы N 2 - 5 диметахлора для градуировки (концентрация 0,25 - 2,5 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 4,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 25 мкг/куб. см (п. 7.10.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией диметахлора 0,25, 0,5, 1,0 и 2,5 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 14-ти дней.

7.10.4. Исходный раствор диметахлора для внесения (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г диметахлора, растворяют в 50 - 60 куб. см метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

7.10.5. Раствор N 1 диметахлора для внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.10.4), доводят до метки метанолом, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более месяца.

Исходный раствор и раствор N 1 используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения диметахлора методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.10.6. Исходный раствор метансульфоната для градуировки и внесения (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,0100 г метансульфоната, добавляют 50 - 70 куб. см метанола, помещают на ультразвуковую баню на 1 мин. для растворения, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре ниже -18 °С в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.10.7. Раствор N 1 метансульфоната для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного градуировочного раствора метансульфоната с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.10.6), разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

Исходный раствор и раствор N 1 используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения метансульфоната методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.10.8. Рабочие растворы N 2 - 5 метансульфоната для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.10.7), доводят до метки смесью растворителей для приготовления градуировочных растворов и растворения образцов (подготовленной по п. 7.9), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией метансульфоната 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 2-х недель.

7.10.9. Исходный раствор оксаламовой кислоты для градуировки и внесения (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,0100 г оксаламовой кислоты, добавляют 50 - 70 куб. см метанола, помещают на ультразвуковую баню на 1 мин. для растворения, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре ниже -18 °С в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.10.10. Раствор N 1 оксаламовой кислоты для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного градуировочного раствора оксаламовой кислоты с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.10.9), разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре ниже -18 °С в течение 3-х месяцев.

Исходный раствор и раствор N 1 используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения оксаламовой кислоты методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.10.11. Рабочие растворы N 2 - 5 оксаламовой кислоты для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.10.10), доводят до метки смесью растворителей для приготовления градуировочных растворов и растворения образцов (подготовленной по п. 7.9), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией оксаламовой кислоты 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более 3-х дней.

7.11.1. Определение диметахлора

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика (мВ х сек.) от концентрации диметахлора в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5.1.1, 9.5.1.2 или 9.5.1.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика диметахлора.

Градуировочный график проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более чем на 18% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.11.2. Определение метансульфоната и оксаламовой кислоты

Градуировочные характеристики, выражающие линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площадей пиков (мкВ х сек.) от концентрации метансульфоната (или оксаламовой кислоты) в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков метансульфоната и оксаламовой кислоты.

Градуировочные графики проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более чем на 10% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г флорисила в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия массой 1 г. Колонка готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора N 1 диметахлора для внесения с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.10.5), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 4 куб. см гексана, помещают на ультразвуковую баню на 1 мин. и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.12. Колбу обмывают дважды гексаном по 2,5 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 50 куб. см гексана, 20 куб. см смеси гексан - этилацетат (9:1, по объему), элюаты отбрасывают.

Затем колонку промывают 50 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см этилацетата, анализируют содержание диметахлора по п. 9.5.1.1 или 9.5.1.2.

Фракции, содержащие диметахлор, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Проверку хроматографического поведения диметахлора следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

Патрон Sep Pak Plus C18 устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума <*>, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом Льюера объемом не менее 10 куб. см, используемый в качестве емкости для элюента.

--------------------------------

<*> В отсутствие специального аллонжа жидкость продавливают через патрон с помощью медицинского шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 1 - 2 капли в сек.

Концентрирующий патрон промывают последовательно 10 куб. см метанола, затем 10 куб. см деионизованной воды. Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителей через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин., при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями: вода - ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", почва - ГОСТ 1743.01-83 "Почва, общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", рапс - ГОСТ 10583-76 "Рапс. Требования при заготовках и поставках", ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 8988-2002 "Масло рапсовое. Технические условия" и Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы воды, почвы, семян рапса хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Пробы масла хранят в закрытой стеклянной при температуре 4 - 6 °С в темноте.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, почвы - просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, семян рапса - измельчают на лабораторной мельнице.

9.1.1. Определение диметахлора

Образец отфильтрованной воды объемом 100 куб. см помещают в химический стакан вместимостью 200 - 300 куб. см, вносят 0,2 куб. см метанола и 0,5 куб. см ортофосфорной кислоты (85%), перемешивают. Затем с помощью медицинского шприца (или разряжения, создаваемого водоструйным насосом) пробу наносят на концентрирующий патрон Sep Pak Plus C18, подготовленный по п. 7.14 со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в сек. После завершения концентрирования пробы патрон промывают 5 куб. см деионизованной воды, элюат отбрасывают. Патрон освобождают от следов влаги (осушают) с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом. Действующее вещество элюируют с патрона 30 куб. см смеси метанол - хлористый метилен (1:9, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 - 150 куб. см, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата и анализируют содержание диметахлора по п. 9.5.1.2.

9.1.2. Определение метансульфоната и оксаламовой кислоты

Образец отфильтрованной воды объемом 100 куб. см помещают в химический стакан вместимостью 200 - 300 куб. см, вносят 0,2 куб. см метанола и 0,5 куб. см ортофосфорной кислоты (85%), перемешивают. Затем с помощью медицинского шприца (или разряжения, создаваемого водоструйным насосом) пробу наносят на концентрирующий патрон Sep Pak Plus C18, подготовленный по п. 7.14 со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в сек. После завершения концентрирования пробы патрон промывают последовательно 5 куб. см воды, 4 куб. см смеси вода - метанол в объемном соотношении 9:1, элюаты отбрасывают. Патрон освобождают от следов влаги (осушают) с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем промывают 5 куб. см хлористого метилена, элюат отбрасывают. Метаболиты диметахлора (метансульфонат и оксаламовую кислоту) элюируют с патрона 30 куб. см смеси метанол - хлористый метилен (1:9, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 - 150 куб. см, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 куб. см смеси растворителей для растворения образцов (подготовленной по п. 7.9), помещая колбу на 2 - 3 мин. в ультразвуковую ванну, и анализируют содержание метансульфоната и оксаламовой кислоты по п. 9.5.2.

9.2.1. Определение диметахлора

9.2.1.1. Экстракция

Образец почвы массой 20 г помещают в круглодонную колбу вместимостью 500 куб. см, вносят 150 куб. см смеси метанол - вода (8:2, по объему), колбу подсоединяют к обратному холодильнику и помещают на кипящую водяную баню на 1 час, по окончании процесса охлаждают.

Раствор (с осадком почвы) фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом. Осадок на фильтре не промывают. Экстракт переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 - 300 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.1.2.

9.2.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Экстракт, полученный по п. 9.2.1.1 и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (~ 30 куб. см) при температуре не выше 40 °С, внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 30 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, 20 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке по п. 9.2.1.3.

9.2.1.3. Очистка экстракта на колонке с флорисилом и переэкстракцией

Остаток, полученный по п. 9.2.1.2 или 9.3.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 4 куб. см гексана, помещая на ультразвуковую баню на 1 мин. Затем раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.12. Колбу обмывают дважды гексаном порциями по 2,5 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 50 куб. см гексана, 20 куб. см смеси гексан - этилацетат (9:1, по объему), элюаты отбрасывают.

Диметахлор элюируют с колонки 50 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 - 150 куб. см, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С.

К гексановому раствору в воронке добавляют 30 куб. см ацетонитрила, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, собирая в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Экстракцию повторяют дважды порциями ацетонитрила по 25 и 20 куб. см.

Объединенный ацетонитрильный экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата (исследование почвы), 1 куб. см этилацетата (исследование семян и масла рапса) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5.1.2.

9.2.2. Определение метансульфоната

9.2.2.1. Экстракция

Образец почвы массой 20 г помещают в круглодонную колбу вместимостью 500 куб. см, вносят 150 куб. см смеси метанол - вода (8:2, по объему), колбу подсоединяют к обратному холодильнику и помещают на кипящую водяную баню на 1 час, по окончании процесса охлаждают.

Раствор (с осадком почвы) фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом. Осадок на фильтре не промывают. Экстракт переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 - 300 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2.2.

9.2.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Экстракт, полученный по п. 9.2.2.1 и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (~ 30 куб. см) при температуре не выше 40 °С, внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см воды, 15 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний гексановый слой отделяют и отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку и операцию промывки повторяют еще дважды порциями гексана по 15 куб. см. Затем водный раствор переносят в колбу вместимостью 150 - 200 куб. см, освобождаются от следов гексана в растворе (до полного отсутствия его запаха) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Водный раствор переносят в химический стакан вместимостью 100 - 150 куб. см, вносят 0,5 куб. см ортофосфорной кислоты (85%), перемешивают и очищают на концентрирующем патроне Sep Pak Plus C18 по п. 9.2.2.3.

9.2.2.3. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Sep Pak Plus C18

Раствор, полученный по п. 9.2.2.2 или 9.2.3.2, с помощью медицинского шприца (или разряжения, создаваемого водоструйным насосом) наносят на концентрирующий патрон Sep Pak Plus C18, подготовленный по п. 7.14 со скоростью пропускания раствора 1 - 2 капли в сек. После завершения концентрирования пробы патрон промывают последовательно 5 куб. см воды, 4 куб. см смеси вода - метанол в объемном соотношении 9:1, элюаты отбрасывают. Патрон освобождают от следов влаги (осушают) с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем промывают 5 куб. см хлористого метилена, элюат отбрасывают. Метаболиты диметахлора (метансульфонат или оксаламовую кислоту) элюируют с патрона 30 куб. см смеси метанол - хлористый метилен (1:9, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 - 150 куб. см, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 куб. см смеси растворителей для растворения образцов (подготовленной по п. 7.9), помещая колбу на 2 - 3 мин. в ультразвуковую ванну, и анализируют содержание метансульфоната или оксаламовой кислоты по п. 9.5.2.

9.2.3. Определение оксаламовой кислоты

9.2.3.1. Экстракция

Образец почвы массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 - 300 куб. см, вносят 100 куб. см деионизованной воды и помещают на механический встряхиватель на 1 час.

Раствор осторожно декантируют с осадка, фильтруя на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом.

В колбу с осадком вносят 100 куб. см 0,1 М раствора серной кислоты, вновь помещают на механический встряхиватель на 1 час.

Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом, объединяя с первым экстрактом. Осадок на фильтре не промывают. Экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см и очищают перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.2.3.2.

9.2.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

В делительную воронку с экстрактом, полученным по п. 9.2.3.1, вносят 100 куб. см 1,5 М раствора хлорида натрия, 2 куб. см концентрированной серной кислоты, добавляют 100 куб. см диэтилового эфира, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через бумажный фильтр, помещенный в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 500 куб. см. Водную фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют, используя 100 куб. см диэтилового эфира. Объединенную органическую фазу, помещенную в круглодонную колбу вместимостью 500 куб. см, упаривают досуха. Остаток растворяют в 50 куб. см деионизованной воды, помещая в ультразвуковую ванну на 5 мин., вносят 0,1 куб. см метанола и 0,25 куб. см ортофосфорной кислоты (85%), перемешивают, переносят в химический стакан вместимостью 100 - 150 куб. см и подвергают дополнительной очистке по п. 9.2.2.3.

9.3.1. Экстракция

Образец измельченных семян массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, вносят 75 куб. см ацетонитрила и помещают на встряхиватель на 40 мин. Полученный экстракт (надосадочная жидкость) фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр "красная лента". Осадок возвращают в коническую колбу и повторяют экстракцию дополнительной порцией ацетонитрила объемом 50 куб. см, выдерживая на встряхивателе 10 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр "красная лента", осадок на фильтре промывают 5 куб. см ацетонитрила. Объединенный отфильтрованный экстракт подвергают очистке по п. 9.3.2.

9.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Объединенный отфильтрованный экстракт, полученный по п. 9.3.1 или 9.4.1, переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, добавляют 30 куб. см гексана (насыщенного ацетонитрилом), интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки, используя 25 куб. см гексана (насыщенного ацетонитрилом). Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С и подвергают очистке на колонке с флорисилом и переэкстракцией по п. 9.2.1.3. Очищенную пробу перед хроматографированием растворяют в 1 куб. см этилацетата и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5.1.1 или 9.5.1.3.

9.4.1. Экстракция

Образец масла массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, вносят 75 куб. см ацетонитрила и интенсивно встряхивают в течение 5 мин. После полного разделения фаз верхний ацетонитрильный слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в коническую колбу вместимостью 150 - 200 куб. см. Экстракцию повторяют дополнительной порцией ацетонитрила объемом 50 куб. см. Объединенный отфильтрованный экстракт подвергают очистке по п. 9.3.2 и 9.2.1.3. Очищенную пробу перед хроматографированием растворяют в 1 куб. см этилацетата и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5.1.1 или 9.5.1.3.

9.5.1. Определение диметахлора (метод ГЖХ)

9.5.1.1. Хроматограф газовый "Кристалл-2000М" с электронозахватным детектором.

Колонка капиллярная DB-5 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 90 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 20 град./мин. до температуры 290 °С, выдержка 3 мин.

Скорость газа 1 (азот): 27,785 см/сек., давление 91 кПа, поток 1,005 куб. см/мин.

Газ 2 (азот): деление потока 1:5; сброс 5 куб. см/мин.

Ориентировочное время удерживания диметахлора - 10 мин. 6 сек.

9.5.1.2. Хроматограф газовый "Кристалл-2000М" с электронозахватным детектором.

Колонка капиллярная ZB-50 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки сорбента 0,5 мкм.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 90 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 10 град./мин. до температуры 290 °С, выдержка 2 мин.

Скорость газа 1 (азот): 25,020 см/сек., давление 69,3 кПа, поток 1,902 куб. см/мин.

Газ 2 (азот): деление потока 1:5; сброс 9,5 куб. см/мин.

Ориентировочное время удерживания диметахлора - 17 мин. 48 сек.

9.5.1.3. Хроматограф газовый "Agilent Technologies 6890N" с масс-селективным детектором 5975С.

Колонка капиллярная HP-5MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура испарителя: 280 °С, режим Splitless: 60 куб. см/мин. - 1 мин., 15 куб. см/мин. - 3 мин.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 90 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 20 град./мин. до температуры 300 °С, выдержка 2 мин.

Скорость газа 1 (гелий): поток в колонке 1 куб. см/мин.

Ориентировочное время удерживания диметахлора - 10 мин. 6 сек.

Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования: 0,25 - 2,5 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 2,5 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию диметахлора в хроматографируемом растворе.

9.5.2. Определение метансульфоната и оксаламовой кислоты (метод ВЭЖХ)

Жидкостной хроматограф "Breeze" с ультрафиолетовым детектором (фирма Waters, США).

Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry(R) C18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,05 М раствор ацетата аммония - ортофосфорная кислота (18:82:0,1, по объему).

Скорость потока элюента: 1,0 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 220 нм.

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочных графиков определяют концентрацию оксаламовой кислоты и метансульфоната в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочные растворы оксаламовой кислоты и метансульфоната с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют смесью растворителей (подготовленной по п. 7.9).

Содержание диметахлора в пробе воды и почвы (Х, мг/куб. дм, мг/кг) с учетом основных метаболитов - метансульфоната и оксаламовой кислоты в эквиваленте действующего вещества рассчитывают по формуле:

где:

Х - содержание диметахлора в пробе воды и почвы с учетом основных метаболитов - метансульфоната и оксаламовой кислоты, мг/куб. дм и мг/кг;

A, B и C - концентрации диметахлора, метансульфоната и оксаламовой кислоты, найденные по градуировочным графикам в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - объем (масса) анализируемого образца, куб. см (г);

K1 и K2 - коэффициенты пересчета содержания метаболитов метансульфоната и оксаламовой кислоты на содержание диметахлора, по соотношению молекулярных масс соответственно равны 0,79 и 1,02.

Содержание диметахлора в пробе семян и масла (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где:

Х - содержание диметахлора в пробе, мг/кг;

A - концентрации диметахлора, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание диметахлора в пробе воды менее 0,005 мг/куб. дм, почвы - менее 0,025 мг/кг, семян и масла рапса - менее 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> - 0,005 мг/куб. дм, 0,025 мг/кг и 0,01 мг/кг - пределы обнаружения в воде, почве, семенах и масле рапса соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):