"МУК 4.1.2349-08. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дифлубензурона в воде хроматографическими методами. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.02.2008)

1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, В.Н. Волкова, С.И. Волчек).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 декабря 2007 г. N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 29 февраля 2008 г.

4. Введены в действие с 18 мая 2008 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают методы высокоэффективной жидкостной и газожидкостной хроматографии для определения в воде массовой концентрации дифлубензурона в диапазоне 0,0025 - 0,025 мг/куб. дм.

1-(4-хлорфенил)-3-(2,6-дифторбензоил)мочевина (IUPAC)

Структурная формула - не приводится.

Область применения

Дифлубензурон используется в качестве инсектицида гормонального действия, нарушающего процесс образования хитина в организме насекомых. Активен против большого числа насекомых, обладает, в основном, кишечным действием. Рекомендуется для борьбы с болезнями плодовых культур (яблоня), овощных (капуста), в лесопосадках для защиты грибов, борьбы с личинками комаров.

ПДК дифлубензурона в воде водоемов - 0,005 мг/куб. дм.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором (УФ) и газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР) после экстракции из анализируемой пробы воды гексаном и последующей очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Для газохроматографического измерения дифлубензурон подвергают кислотному гидролизу с последующей обработкой трифторуксусным ангидридом.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный и газовый хроматографы.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном и газовом хроматографах.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов, градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. Очистка н-Гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

Навеску гидроксида натрия массой 50 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Для приготовления 3,6 М и 1 М растворов в мерные колбы вместимостью 100 куб. см, содержащие 30 - 40 куб. см дистиллированной воды, помещают соответственно 30 куб. см или 8 куб. см соляной кислоты, доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 550 куб. см ацетонитрила и 450 куб. см бидистиллированной или деионизованной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4) при скорости подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

Готовую насадку (Супелкопорт с 5% OV-210) засыпают в стеклянную колонку длиной 1 м, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хромаматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 260 °C в течение 10 - 12 ч.

7.7.1.1. Исходный раствор дифлубензурона для градуировки (концентрация 1 мг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,100 г дифлубензурона, добавляют 50 - 70 куб. см ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.7.1.2. Раствор N 1 дифлубензурона для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора дифлубензурона с концентрацией 1 мг/куб. см (п. 7.7.1.1), разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.7.1.3. Рабочие растворы N 2 - 5 дифлубензурона для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/куб. см)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.7.1.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией дифлубензурона 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение недели.

7.7.2.1. Исходный раствор дифлубензурона для градуировки (концентрация 200 мкг/куб. см).

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,0200 г дифлубензурона, добавляют 50 - 70 куб. см метанола, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.7.2.2. Раствор N 1 производного дифлубензурона для градуировки (соответствует концентрации дифлубензурона 20 мкг/куб. см)

В круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора дифлубензурона с концентрацией 200 мкг/куб. см (п. 7.7.2.1), растворитель отдувают потоком теплого воздуха и проводят гидролиз и дериватизацию согласно пп. 9.2 и 9.3 соответственно. Раствор полученного производного упаривают до 5 - 7 куб. см, переносят в мерную пробирку и добавляют бензол до объема 10 куб. см. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Растворы N 2 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления раствора N 1 производного дифлубензурона для градуировки.

7.7.2.3. Рабочие растворы N 2 - 5 производного дифлубензурона для градуировки (соответствуют концентрации дифлубензурона 0,1 - 1,0 мкг/куб. см).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 20 мкг/куб. см (п. 7.7.2.2), доводят до метки бензолом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией дифлубензурона 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение недели.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации дифлубензурона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки N 2 - 5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4.1. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков дифлубензурона.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость высоты пика (мм) от концентрации дифлубензурона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам производного дифлубензурона для градуировки N 2 - 5.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают высоты пиков производного дифлубензурона.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Пробы воды анализируют в день отбора, при необходимости хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 10 дней. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °C.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.

Образец анализируемой воды объемом 200 куб. см помещают в стакан вместимостью 400 куб. см, добавляют 5 - 7 куб. см 1 М соляной кислоты до pH не более 2 (контроль по индикаторной бумаге). Подкисленный раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, приливают 50 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой переносят в коническую колбу вместимостью 250 куб. см. Водную фазу возвращают в делительную воронку, операцию экстракции повторяют еще дважды порциями гексана по 50 куб. см. Объединенный гексановый экстракт помещают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, приливают 50 куб. см ацетонитрила, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, фильтруя через слой (2 см) безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром "красная лента". Операцию экстракции гексанового раствора повторяют еще дважды порциями ацетонитрила по 50 куб. см. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха.

Сухой остаток при проведении измерений методом ВЭЖХ (по п. 9.4.1) растворяют в 5 куб. см подвижной фазы, центрифугируют (фильтруют через слой стекловаты, помещенный в конусную химическую воронку) и анализируют содержание дифлубензурона в соответствии с п. 9.4.1.

При проведении измерений методом ГЖХ (по п. 9.4.2) сухой остаток подвергают гидролизу и дериватизации в соответствии с пп. 9.2 и 9.3.

В колбу с сухим остатком, полученным по п. 9.1 (или при упаривании исходного раствора дифлубензурона по п. 7.7.2.2), вносят 60 куб. см 3,6 М раствора соляной кислоты, подсоединяют обратный холодильник, выдерживают колбу в течение 6 часов на кипящей водяной бане. После охлаждения к реакционной массе добавляют 12,5 N раствор гидроксида натрия до pH 10 (контроль по индикаторной бумаге), переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, вносят в воронку 50 куб. см бензола, интенсивно встряхивают 1 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, фильтруя его через слой (2 см) безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром "красная лента". Операцию экстракции водного раствора повторяют еще дважды порциями бензола по 50 куб. см. Отстоявшийся слой бензола (верхний слой) фильтруют через сульфат натрия в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 20 - 30 куб. см и подвергают дериватизации по п. 9.3.

В колбу с бензольным раствором, полученным по п. 9.2, вносят 0,5 куб. см ангидрида трифторуксусной кислоты, подсоединяют обратный холодильник, выдерживают колбу на водяной бане при температуре 50 °C в течение 3 часов. После охлаждения раствор упаривают до 3 - 4 куб. см, переносят в градуированную пробирку вместимостью 5 куб. см, доводят бензолом до объема 5 куб. см и анализируют содержание дифлубензурона в соответствии с п. 9.4.2.

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Perkin-Elmer, США).

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (55:45, по объему).

Скорость потока элюента: 0,3 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 280 нм.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.

Ориентировочное время выхода дифлубензурона: 7,36 - 7,78 мин.

Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор дифлубензурона с концентрацией 1 мкг/куб. см, разбавляют (не более чем в 50 раз) подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.4).

Хроматограф газовый "Цвет 560-02" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов.

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Супелкопортом (0,16 - 0,12 мм) с 15% OV-210.

Температура термостата колонки - 130 °C

детектора - 300 °C

испарителя - 150 °C.

Скорость газа-носителя (азот) - 25 +/- 1 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы - 1 куб. мм.

Ориентировочное время удерживания производного дифлубензурона 2 мин. 35 с.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор производного дифлубензурона с концентрацией 1 мкг/куб. см, разбавляют (не более чем в 50 раз) бензолом.

Содержание дифлубензурона в пробе рассчитывают по формуле:

где:

X - содержание дифлубензурона в пробе, мг/куб. дм;

A - концентрация дифлубензурона, найденная по градуировочному графику, в соответствии с величиной площадей (высоты) хроматографического пика, мкг/куб. см;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

V - объем анализируемого образца воды, куб. см.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,0025 мг/куб. дм" <*>.

--------------------------------

<*> 0,0025 мг/куб. дм - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.