"МУК 4.1.2700-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций эндо-(+/-)-альфа-(гидроксиметил)бензолуксусной кислоты 8-метил-8-забицикло[3.2.1]окт-3-илового эфира, сульфата (2:1) (атропина сульфат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Методические указания подготовлены коллективом авторов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10 июня 2010 г. N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем атропина сульфата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовой концентрации от 0,001 до 0,02 мг/куб. м. Погрешность измерений соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.

Методика аттестована в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 (с изменениями N 1, 2), ГОСТ Р ИСО 5725-2002. Свидетельство о государственной метрологической аттестации выдано ФГУП Всероссийским научно-исследовательским институтом метрологической службы Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии N 84-08.

2.1. Структурная формула (не приводится).

2.3. Молекулярная масса: 694,8.

2.4. Регистрационный номер CAS: 5908-99-6.

2.5. Физико-химические свойства

Атропина сульфат - белый кристаллический или зернистый порошок, без запаха, с температурой плавления (188 - 194) °C, легко растворим в воде и спирте этиловом 96%-ном, практически нерастворим в хлороформе и эфире.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика

Атропина сульфат опасен при попадании на кожу и слизистые оболочки, обладает выраженной кумулятивной активностью.

В связи с высокой биологической активностью и небольшим объемом производства ПДК на атропин сульфат не устанавливается, в перечень ПДК вносится пометка "++". При работе с атропином должен быть исключен контакт с органами дыхания и кожей при обязательном контроле воздуха рабочей зоны на уровне чувствительности не менее 0,001 мг/куб. м.

При соблюдении всех регламентных условий и проведении анализа в точном соответствии с прописью методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций атропина сульфата с метрологическими характеристиками, не превышающими значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

Измерение массовой концентрации атропина сульфата выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием.

Измерение проводят при длине волны 210 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр АФА-ВП-10.

Нижний предел измерения содержания атропина сульфата в анализируемом объеме раствора пробы - 0,02 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации атропина сульфата в воздухе - 0,001 мг/куб. м (при отборе 300 куб. дм воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе атропина сульфата. Измерению не мешают сопутствующие вещества: мальтодекстрин, магния стеарат, крахмал, аэросил, гидрофосфат кальция, гидроксипропилметилцеллюлоза.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы.

Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в данном разделе.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой хроматографического анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедур погрешности анализа.

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовку проб к анализу проводят в стандартных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Стеклянную посуду ополаскивают ацетоном для удаления органических примесей, несколько раз промывают водопроводной водой, заливают хромовой смесью и выдерживают один час. После этого посуду извлекают из хромовой смеси, ополаскивают несколько раз водопроводной, а затем дистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу. Чистую посуду для анализа хранят в закрытом виде.

9.2.1. Приготовление основного стандартного раствора атропина сульфата с массовой концентрацией 1000 мкг/куб. см.

Навеску (0,0250 +/- 0,0001) г атропина сульфата растворяют в спирте этиловом 96%-ном в мерной колбе вместимостью 25 куб. см. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.2.2. Приготовление рабочего стандартного раствора атропина сульфата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см.

Отбирают 2,5 куб. см основного стандартного раствора атропина сульфата пипеткой вместимостью 5 куб. см, помещают в мерную колбу вместимостью 25 куб. см и доводят объем до метки спиртом этиловым 96%-ным. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.2.3. Приготовление элюента

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см вносят 750 куб. см дистиллированной воды и по каплям (примерно 0,5 - 0,7 куб. см) добавляют раствор о-фосфорной кислоты с массовой долей 85% до pH = 2,3 (pH устанавливается с помощью иономера). Объем раствора доводят до метки ацетонитрилом. Раствор дегазируют и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,2 - 0,45 мкм.

Элюент хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение месяца.

Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по эксплуатации.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания атропина сульфата в хроматографируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной калибровки по шести сериям растворов. Каждую серию, состоящую из шести градуировочных растворов и холостой пробы, готовят в мерных колбах вместимостью 25 куб. см. Для этого в соответствии с табл. N 2 в каждую колбу вносят соответствующий объем рабочего стандартного раствора атропина сульфата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%-ным.

При приготовлении градуировочных растворов используют пипетки вместимостью 1; 2 и 5 куб. см.

Градуировочные растворы устойчивы в течение трех суток.

Инжектируют в хроматограф по 0,02 куб. см каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (усл. ед. x c) от содержания атропина сульфата в хроматографируемом объеме (мкг).

Состав элюента:

Ацетонитрил:водный раствор о-фосфорной кислоты (pH = 2,3), 25:75 (по объему)

За время удерживания атропина сульфата принимают время удерживания его пика, полученное при анализе основного раствора атропина сульфата, с допускаемым отклонением +/- 5%.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией атропина сульфата в начале, середине и в конце измерений и анализируют в точном соответствии с прописью методики.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

где +/- дельта - границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировочной характеристики, предусмотренной методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Воздух с объемным расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10.

Для измерений содержания атропина сульфата на уровне 0,001 мг/куб. м отбирают 300 куб. дм воздуха. Фильтры с отобранной пробой хранят в бюксах в холодильнике в течение недели.

Фильтр с отобранной пробой помещают в химический бюкс и экстрагируют атропина сульфат, добавив 5,0 куб. см спирта этилового 96%-ного, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 5 - 7 минут, затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс. Фильтр повторно обрабатывают 5,0 куб. см спирта этилового 96%-ного, снова тщательно отжимают и удаляют. Степень десорбции атропина сульфата с фильтра 98%. Экстракты последовательно фильтруют с использованием химической воронки через бумажный фильтр "белая лента". Полученный раствор переносят в остродонную колбу со шлифом. Колбу присоединяют к ротационному испарителю и упаривают растворитель при температуре (50 - 60) °C досуха. Сухой остаток в колбе растворяют в 0,3 куб. см спирта этилового 96%-ного. Для анализа отбирают 0,020 куб. см полученного раствора. Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой пробы.

Количественное определение содержания атропина сульфата (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводят для удаления нерастворимых в спирте этиловом вспомогательных веществ, входящих в состав препаративных форм атропина сульфата.

Массовую концентрацию атропина сульфата в воздухе рабочей зоны C (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где:

а - содержание атропина сульфата в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

В - общий объем раствора пробы, куб. см;

б - хроматографируемый объем раствора пробы, куб. см;

K - степень десорбции вещества с фильтра, K = 0,98.

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

+/- дельта - границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация атропина сульфата менее 0,001 мг/куб. м (более 0,02 мг/куб. м)".

Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 3 часа 30 минут (без учета времени отбора пробы).

Методика разработана ОАО "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" ("ВНЦ БАВ").

Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре 293 К (20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.):

Атропина сульфат

Бродифакум

Бромадиолон

Гексаметилентетрамин

Диоксид циркония

Пиретрум

Ритонавир

Ставудин

Уротропин

ЭП

Этилпрокситол