"МУК 4.1.2275-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тефлутрина в воде, почве, сахарной свекле, капусте, зеленой массе, семенах и масле кукурузы и подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 24.09.2007)

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21.06.2007).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г.

4. Введены в действие с 10 декабря 2007 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации тефлутрина в воде в диапазоне 0,0005 - 0,005 мг/куб. дм, в почве, капусте, масле кукурузы и подсолнечника в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, в ботве сахарной свеклы, зеленой массе подсолнечника и кукурузы в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг, в корнеплодах сахарной свеклы, зерне кукурузы и семенах подсолнечника в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/кг.

Название вещества по ИСО: Тефлутрин.

Название вещества по ИЮПАК: 2,3,5,6-тетрафтор-4-метилбензил(Z)-(1RS,3RS)-3-(2-хлор-3,3,3-трифторпроп-1-енил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.

Структурная формула (не приводится).

Растворимость (г/куб. дм) при 20 °С: ацетон, гексан, толуол, дихлорметан, этилацетат - более 500, метанол - 263, вода - 0,00002.

Вещество стабильно при хранении на воздухе и не гидролизуется при рН 5 - 7 и слабо гидролизуется (9,7%) при рН 9 (экспозиция - 30 дней).

Инсектицид нетоксичен для птиц, дафний, земляных червей, почвенных микроорганизмов и умеренно токсичен для пчел.

Гигиенические нормативы для тефлутрина в России:

ПДК в почве - 0,14 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/куб. дм; МДУ в сахарной свекле, семенах и масле кукурузы и подсолнечника - 0,05 мг/кг.

Область применения

Тефлутрин - инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов. Он эффективно подавляет развитие комплекса почвенных вредителей (особенно из отрядов жесткокрылых, двукрылых и чешуекрылых) таких культур, как кукуруза, сахарная свекла, яровая пшеница, подсолнечник при норме расхода при почвенном внесении 12 - 150 г/га, при протравливании семян 20 - 40 г/100 кг семян.

Проходит испытания в России и странах СНГ в качестве инсектицида для применения в посевах кукурузы, подсолнечника, сахарной свеклы, в посадках картофеля и капусты путем предпосевного протравливания семян или почвенного внесения.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Методика основана на определении вещества с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД). Контроль тефлутрина в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции из воды гексаном, из почвы, ботвы и корнеплодов сахарной свеклы, кочанов капусты, зеленой массы и семян кукурузы и подсолнечника водным ацетоном, а из масла - метанолом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонках с силикагелем и оксидом алюминия.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 + 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонок с силикагелем и оксидом алюминия.

7.1.1. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения ее окрашивания в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.2. Очистка диэтилового эфира

Растворитель предварительно встряхивают со свежеприготовленным раствором железного купороса, а затем последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля в 15 куб. см смеси гексана и диэтилового эфира (85:15, по объему) или суспензию 5 г оксида алюминия основного в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонки промывают 15 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в сек., после чего они готовы к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см градуировочного раствора N 1 тефлутрина с концентрацией 1 мкг/куб. см в гексане (п. 7.5.2), отдувают растворитель током азота, остаток растворяют в 3 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонки с силикагелем и оксидом алюминия, подготовленные по п. 7.2. Колонки промывают 30 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в сек., который отбрасывают. Затем колонку с силикагелем промывают 25 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (85:15 по объему), а колонку с оксидом алюминия 25 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20 по объему). Фракционно (по 5 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см гексана и анализируют на содержание тефлутрина по п. 9.5.

Засыпают готовую насадку (3% SE-30 на Хромосорбе W/HP) в стеклянную колонку и уплотняют под вакуумом. Колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 250 °С и скорости газа-носителя 2,5 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов.

7.5.1. Исходный раствор тефлутрина для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,010 г тефлутрина, растворяют в 40 - 50 куб. см гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение 3-х месяцев.

7.5.2. Раствор тефлутрина N 1 для градуировки (концентрация 1 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора тефлутрина с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют гексаном до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.

При оценке полноты извлечения тефлутрина для внесения в образцы используют ацетоновые растворы с концентрацией 1 мкг/куб. см. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора тефлутрина с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца.

7.5.3. Рабочие растворы N 2 - 5 тефлутрина для градуировки (концентрация 0,005 - 0,05 мкг/куб. см)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 куб. см градуировочного раствора N 1 тефлутрина с концентрацией 1 мкг/куб. см (п. 7.5.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией тефлутрина 0,005, 0,01, 0,025 и 0,05 мкг/куб. см соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед употреблением.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х с) от концентрации тефлутрина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 2 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 7.5.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТами Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", 26950-89 "Почвы. Отбор проб", 17421-82 "Свекла сахарная для промышленной переработки. Требования при заготовках", Р 50436-92 "Зерновые. Отбор проб зерна", 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", 26768-85 "Капуста белокочанная свежая. Технические условия" и 1724-85 "Капуста белокочанная. Технические условия".

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °С не более 2-х недель.

Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более 4-х недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Пробы зеленой массы кукурузы и подсолнечника, кочанов капусты, ботвы и корнеплодов сахарной свеклы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при -18 °С.

Пробы зерна и семян высушивают до стандартной влажности и хранят в холодильнике при температуре 4 °С.

Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4 - 6 °С.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, образцы почвы просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, зерно и семена размалывают на мельнице, а зеленую массу измельчают ножом.

9.1.1. Вода. Образец отфильтрованной воды объемом 100 куб. см помещают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. В воронку вносят 20 куб. см гексана, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х минут. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажный фильтр в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха при температуре не выше 25 °С. Остаток в колбе растворяют в 1 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание тефлутрина по п. 9.5.

9.1.2. Почва. Образец воздушно-сухой почвы массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон - вода (80:20, по объему) и помещают на ультразвуковую баню на 5 минут.

Раствор (с осадком почвы) фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон - вода (80:20, по объему). Экстракт и промывную жидкость, объединенные в мерном цилиндре, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/10 его часть (эквивалентную 2 г образца) переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.3. Зерно, семена. Образец размолотого зерна или семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 70 куб. см смеси ацетон - вода (80:20, по объему) и помещают на встряхиватель на 40 минут.

Раствор (с осадком) фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 35 куб. см смеси ацетон - вода (80:20, по объему). Экстракт и промывную жидкость, объединенные в мерном цилиндре, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/5 его часть (эквивалентную 2 г образца) переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.4. Зеленая масса, ботва, корнеплоды, кочаны. Образец растительного материала массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон - вода (80:20, по объему) и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон - вода (80:20, по объему). Экстракт и промывную жидкость, объединенные в мерном цилиндре, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/10 его часть (эквивалентную 2 г образца) переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.5. Масло. Образец масла массой 5 г вносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, добавляют 10 куб. см гексана, перемешивают. В воронку вносят 40 куб. см метанола, интенсивно встряхивают воронку в течение 3-х мин. После полного разделения фаз верхний метанольный слой отделяют и собирают в мерный цилиндр вместимостью 250 куб. см. Операцию экстракции масляной фазы повторяют еще дважды, используя по 30 куб. см метанола. Измеряют объем объединенной метанольной фазы и последнюю центрифугируют 5 мин. при 6000g. Из надосадочной части отбирают 1/5 объема метанольной фазы (эквивалентна 1 г образца) и переносят в круглодонную колбу. Экстракт в круглодонной колбе упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 °С. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.4.

Экстракт, полученный по пп. 9.1.2, 9.1.3 и 9.1.4 и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (2 - 3 куб. см) при температуре не выше 25 °С, внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. К водному остатку прибавляют 10 куб. см бидистиллированной воды, 10 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 10 куб. см гексана, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 10 куб. см гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха при температуре не выше 25 °С и подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем по п. 9.3.

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2, растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 4 куб. см гексана и 2 куб. см полученного раствора наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.2. Колонку промывают 25 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, который отбрасывают. Тефлутрин элюируют с колонки 15 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (85:15, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 25 °С. Сухой остаток экстрактов корнеплодов свеклы, семян подсолнечника и кукурузы растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 1 куб. см гексана, экстрактов почвы и капусты в 2 куб. см, ботвы и зеленой массы в 10 куб. см гексана и анализируют на содержание тефлутрина по п. 9.5.

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.1.5, растворяют в 3 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с оксидом алюминия, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают дважды порциями по 3 куб. см гексана, которые также наносят на колонку. Колонку промывают 25 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в сек., который отбрасывают. Тефлутрин элюируют с колонки 15 мл смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 25 °С. Остаток в колбе растворяют в 2 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание тефлутрина по п. 9.5.

9.5.1. Метод ГЖХ с насадочной колонкой

Колонка хроматографическая стеклянная, 2000 х 2 мм, неподвижная фаза - 3% SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм).

Температура испарителя - 200 °С, термостата колонки - 170 °С, детектора - 300 °С.

Скорость потока газа-носителя (азот) - 30 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы - 2 куб. мм.

Время удерживания тефлутрина - 2 мин. 55 с - 2 мин. 58 с.

Предел детектирования - 0,01 нг.

Линейный диапазон детектирования: 0,01 - 0,2 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,05 мкг/куб. см, разбавляют гексаном.

9.5.2. Метод ГЖХ с капиллярной колонкой

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex (США).

Температура термостата испарителя - 200 °С, детектора - 300 °С, термостата колонки (программа: 120 °С - 2 мин.; 15°/мин. до 175 °С, выдержка - 10 мин.).

Газовый режим: газ-носитель - азот, расход - 4,0 куб. см/мин.

Деление потока: без деления.

Объем вводимой пробы - 1 куб. мм.

Время удерживания тефлутрина - 13 мин. 05 с.

Предел детектирования - 0,005 нг.

Линейный диапазон детектирования: 0,005 - 0,1 нг.

Содержание тефлутрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения"

< 0,0005 мг/куб. дм <*> для воды, < 0,005 <**> мг/кг для корнеплодов сахарной свеклы, зерна кукурузы и семян подсолнечника, < 0,01 мг/кг <***> для почвы, капусты, масла кукурузы и подсолнечника, < 0,05 <****> мг/кг для ботвы свеклы, зеленой массы кукурузы и подсолнечника.

--------------------------------

<*> 0,0005 мг/кг - предел обнаружения для воды.

<**> 0,005 мг/кг - предел обнаружения для корнеплодов сахарной свеклы, зерна кукурузы и семян подсолнечника.

<***> 0,01 мг/кг - предел обнаружения для почвы, капусты, масла кукурузы и подсолнечника.

<****> 0,05 мг/кг - предел обнаружения для ботвы свеклы, зеленой массы кукурузы и подсолнечника.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):