"МУК 4.1.2544-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств мандипропамида в воде, почве, клубнях картофеля, ягодах винограда, плодах томата, огурцов и луке-репке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 09.09.2009)

1. Разработаны: Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.

4. Введены в действие с 1 декабря 2009 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации мандипропамида в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/куб. дм в воде, 0,01 - 0,1 мг/кг в почве, 0,02 - 0,2 мг/кг в клубнях картофеля, ягодах винограда и виноградном соке, плодах томата, огурцов и луке-репке.

Название действующего вещества по ИЮПАК:

2-(4-хлорфенил)-N-[3-метокси-4-(проп-2-инилокси)фенэтил]-2-(проп-2-инилокси)ацетамид.

Структурная формула: (не приводится).

Молекулярная масса: 411,9.

Область применения.

Мандипропамид - фунгицид системного действия, проникает в растения через листья. Эффективен как ингибитор мицелиального роста и споруляции, препятствует развитию спор. Адсорбируется восковым слоем растений, что препятствует его смыванию дождями. Поскольку мандипропамид попадает в ткани растений, он защищает и нижнюю поверхность листьев.

Мандипропамид используют для борьбы с оомицетами на растениях винограда, картофеля и томатов, бахчевых культур с нормой расхода 100 - 150 г/га.

В России предлагается для применения в качестве фунгицида в посадках картофеля, томатов, посевах огурца, лука и на виноградниках с нормой расхода 0,4 - 0,6 л/га по препарату при четырехкратной обработке.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД для человека - 0,03 мг/кг/сут.;

ПДК в воде водоема - 0,05 мг/куб. дм;

ОДК в почве - 0,24 мг/кг;

ВМДУ (мг/кг): томаты - 1,0, ягоды винограда - 2,0, лук-репка - 0,1, огурцы - 0,2;

МДУ (мг/кг) клубни картофеля - 0,1.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении мандипропамида с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового или диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, очистки экстракта на колонках с окисью алюминия, с Флоризилом, концентрирующих патронах Диапак C и Диапак C16.

Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак C8 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на патронах, построение калибровочной кривой.

7.1.1. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил перегоняют.

7.1.2. Очистка гексана. Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика, Москва, 1976 г., с. 441).

7.1.3. Очистка бидистиллированной воды. Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.

7.1.4. Очистка этилового эфира уксусной кислоты. Этиловый эфир уксусной кислоты промывают равным объемом 5% раствора соды, сушат над безводным хлористым кальцием (Беккер Г. и др. Органикум, Москва, 1979 г., с. 372), кипятят в течение 1 ч с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.

7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.

В плоскодонную колбу объемом 1 куб. дм помещают 600 куб. см ацетонитрила и 400 куб. см очищенной воды. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов.

7.2.2.1. Стандартный раствор с концентрацией мандипропамида 1,0 мг/куб. см. Взвешивают 50 мг мандипропамида в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.2.2.2. Стандартный раствор с концентрацией мандипропамида 10,0 мкг/куб. см. Из стандартного раствора мандипропамида с концентрацией 1,0 мг/куб. см отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании.

7.2.2.3. Стандартные растворы мандипропамида с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см для построения калибровочной кривой и внесения в образцы. Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см, и используют эти растворы для хроматографического исследования и для внесения в образцы.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации мандипропамида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

7.4.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта. В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 5 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента высотой примерно 5 см. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 куб. см ацетонитрила.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на колонке с окисью алюминия. В концентратор объемом 50 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора мандипропамида в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор и упаривают досуха при температуре не выше 30 °C. Исходную колбу обмывают еще двумя порциями ацетонитрила объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.

Изучение поведения мандипропамида на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

7.5.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак C для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.

Патрон Диапак C устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, затем 10 куб. см гексана. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на концентрирующем патроне Диапак C. Из стандартного раствора мандипропамида в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в круглодонную колбу объемом 100 куб. см и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и смыв вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают тремя порциями смеси гексан-этилацетат в соотношении 2:1 объемом по 5 куб. см и последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в отдельный концентратор объемом 100 куб. см, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.

7.6.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак C16 для очистки экстракта. Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин.

Патрон Диапак C16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.6.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на концентрирующем патроне Диапак C16. Из стандартного раствора мандипропамида в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, затем 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1 и полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.

7.7.1. Подготовка колонки с флоризилом. В стеклянную или пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно стекловату и заполняют колонку флоризилом на высоту 10 см. На слой флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. В день очистки экстракта колонку промывают последовательно 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1 и 20 куб. см гексана. После промывки колонка готова к работе.

7.7.2. Проверка хроматографического поведения мандипропамида на колонке с флоризилом. При отработке методики или поступлении новой партии сорбента (флоризил) проводят изучение поведения мандипропамида на колонке.

Для этого в концентратор (или пробирку) вносят 1 куб. см стандартного раствора мандипропамида концентрацией 1 мкг/мл, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C или в токе теплого воздуха.

Затем растворяют мандипропамид в 2 куб. см этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на подготовленную, как указано выше, колонку. Промывают колонку 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, смыв отбрасывают. Затем пропускают через колонку 20 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:3, отбирая последовательно по 5 куб. см элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы объемом 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие мандипропамид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry Shield C18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 - 4 ч.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 7176-85 "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ", ГОСТ 26832-86 "Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ", ГОСТ 25896-83 "Виноград свежий столовый. ТУ", ГОСТ Р 51810-2001 "Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети", ГОСТ Р 1726-85 "Огурцы свежие. ТУ" и ГОСТ Р 51783-2001 "Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ".

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4 °C не более 10 суток. Пробы винограда, клубней картофеля, томатов, огурцов и лука хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °C не более 3 суток. Для длительного хранения пробы клубней картофеля, винограда, томатов, огурцов и лука замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до 2 лет.

Пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

9.1.1. Экстракция. Пробу воды объемом 100 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см и экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 куб. см, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

9.1.2. Очистка на концентрирующих патронах Диапак C16. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон, подготовленный по п. 7.6.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат отбрасывают, мандипропамид элюируют 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.

9.2.1. Экстракция. Пробу почвы весом 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 250 куб. см, прибавляют 10 куб. см воды, тщательно перемешивают содержимое и добавляют 70 куб. см смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1. Банку помещают в ультразвуковую ванну и выдерживают в течение 10 мин. По истечении срока банку дополнительно встряхивают 10 мин. на механическом встряхивателе. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. на скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия.

Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 70 куб. см смеси ацетонитрил-вода в соотношении 9:1 и помещая каждый раз на 10 мин. в ультразвуковую ванну и дополнительно на 10 мин. на механический встряхиватель. Супернатант каждый раз фильтруют через фильтр "красная лента" в ту же коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия, перемешивают и выдерживают 10 мин. при комнатной температуре. Объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) объемом 250 куб. см, оставляют до полного разделения слоев и нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 5 куб. см этилацетата, обмывают стенки колбы, затем прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Мандипропамид экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C и Диапак C16. Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 10 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную по п. 7.4.1 колонку с окисью алюминия. Элюат собирают в концентратор. Исходную колбу обмывают 10 куб. см ацетонитрила и вносят на колонку. Элюаты объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и смыв вносят на патрон Диапак C, подготовленный по п. 7.5.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и полученный раствор вносят на патрон, элюат отбрасывают. Мандипропамид элюируют 15 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 2:1 в чистый концентратор. Раствор выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон Диапак C16, подготовленный по п. 7.6.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат отбрасывают. Мандипропамид элюируют 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

9.3.1. Экстракция. Образец измельченных клубней картофеля (или ягод винограда) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 10 куб. см дистиллированной воды, 50 куб. см ацетонитрила и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на механический встряхиватель. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 5 мин. на механический встряхиватель. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия, перемешивают и выдерживают 10 мин. при комнатной температуре.

Затем объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) объемом 250 куб. см, оставляют до полного разделения слоев и нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и упаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C и Диапак C16.

После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

9.4.1. Экстракция. Образец измельченного лука-репки массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 куб. см с 5 г хлорида натрия, перемешивают и выдерживают 10 минут при комнатной температуре. Затем объединенный экстракт из колбы переносят в делительную воронку (нерастворившуюся соль оставляют в колбе) объемом 250 куб. см, оставляют до полного разделения слоев и нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

9.4.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.2.1, прибавляют 5 куб. см ацетонитрила, обмывают стенки колбы, затем прибавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 мл насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Мандипропамид экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

9.4.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия. Сухой остаток, полученный по п. 9.6.2, растворяют в 10 куб. см ацетонитрила и очищают на колонке с окисью алюминия п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия.

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

9.4.4. Очистка экстракта на колонке с флоризилом. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см гексана, перемешивают и вносят на колонку с флоризилом, подготовленную по п. 7.7.1. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, элюат отбрасывают. Мандипропамид элюируют 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:3. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и хроматографируют.

1. Хроматограф "Waters" с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм x 25 см, зернением 5 мкм.

Предколонка стальная Symmetry C8, 3,9 мм x 2 см, зернением 5 мкм.

Температура колонки: 25 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 60:40.

Длина волны 230 нм.

Время удерживания мандипропамида 10,82 +/- 0,16 мин.

Чувствительность 0,005 ед. оптической плотности на шкалу.

Объем вводимой пробы 20 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

2. Хроматограф жидкостной Waters 515 HPLC Pump с диодно-матричным детектором фирмы Agilent Technologies G1315B или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм x 250 мм, зернением 5 мкм.

Предколонка стальная Symmetry Shield C18, 3,9 мм x 20 мм, зернением 5 мкм.

Температура колонки: 25 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 60:40.

Длина волны 230 нм.

Время удерживания мандипропамида 7,313 мин. +/- 3%.

Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.

Объем вводимой пробы 20 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01 или Agilent Technologies ChemStation for LC 3D.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание мандипропамида рассчитывают по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".