"МУК 4.1.2087-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Альфа-циперметрина в семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Роспотребнадзором 30.07.2006)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в семенах и масле рапса массовых концентраций альфа-циперметрина в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/кг.

Альфа-циперметрин - действующее вещество препарата ФАСТАК, КЭ (100 г/л), фирма-производитель "БАСФ".

(S)-альфа-циано-3-феноксибензил(1R,3R)-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилциклопропан-карбоксилат и (R)-альфа-циано-3-феноксибензил(1S,3S)-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметил циклопропанкарбоксилат (ИЮПАК), рацемат.

Структурная формула (не приводится).

Альфа-циперметрин очень стабилен в нейтральной и кислой среде. Термически стабилен до 220 °С. Устойчив на воздухе и на свету.

Краткая токсикологическая характеристика

Область применения препарата

Альфа-циперметрин - инсектицид контактного и внутреннего действия, используемый для борьбы с жующими и сосущими насекомыми.

Препарат Фастак, КЭ (100 г/л) рекомендуется к применению на фруктах (включая цитрусовые), овощах, злаковых культурах, кукурузе, картофеле, хлопке, рисе, сое, рапсе и других технических культурах.

МДУ в рапсе - не допускается.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Методика основана на определении вещества с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором электронного захвата ионов (ДЭЗ) после экстракции из анализируемой пробы семян рапса смесью ацетонитрил - вода, масла - ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонке с флорисилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 0,01 нг.

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания рапса.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке.

7.1.1. Очистка ацетона

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед использованием ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2.1. Исходный раствор альфа-циперметрина для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г альфа-циперметрина, растворяют в 50 - 70 куб. см гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 4-х месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.2.2. Раствор N 1 альфа-циперметрина для градуировки (концентрация 1 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.2.1), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7.2.3. Рабочие растворы N 2 - 5 альфа-циперметрина для градуировки (концентрация 0,01 - 0,1 мкг/куб. см)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.2.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией альфа-циперметрина 0,01, 0,02, 0,05 и 0,1 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более 2-х недель.

7.3.1. Исходный раствор альфа-циперметрина (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 001 г альфа-циперметрина, растворяют в 50 - 70 куб. см изопропилового спирта, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.

7.3.2. Основной раствор альфа-циперметрина для внесения (концентрация 1 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.3.1), доводят до метки изопропиловым спиртом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике не более 2-х недель.

Этот раствор используют для оценки полноты извлечения альфа-циперметрина из исследуемых образцов методом "внесено-найдено", а также контроля качества результатов измерений методом добавок.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х сек.) от концентрации альфа-циперметрина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г флорисила в 15 - 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1,5 см. Колонка готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 1 куб. см раствора N 5 для градуировки с концентрацией альфа-циперметрина 0,1 мкг/куб. см, добавляют 2 куб. см гексана, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.5. Промывают колонку 50 куб. см гексана, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 70 куб. см смеси гексан - этилацетат (95:5, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см гексана, анализируют содержание альфа-циперметрина по п. 9.3.

Фракции, содержащие альфа-циперметрин, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Проверку хроматографического поведения альфа-циперметрина следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора", "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы семян и масла рапса хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике (4 - 6 °С) не более 1 месяца. Для длительного хранения образцы семян, не предназначенные для изготовления масла, замораживают и хранят при температуре -18 °С. Пробы масла, приготовленные в лаборатории, хранят в холодильнике не более 1 суток.

Перед анализом образцы семян измельчают.

9.1.1. Экстракция

Образец измельченных семян рапса массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, вносят 50 куб. см смеси ацетонитрил - вода (80:20, по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин.

Экстракт осторожно декантируют, фильтруя через бумажный фильтр "красная лента", в колбу для упаривания вместимостью 50 куб. см. Экстракцию повторяют еще дважды, используя по 50 куб. см смеси ацетонитрил - вода (80:20, по объему). Экстракты объединяют.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Объединенный отфильтрованный экстракт, полученный по п. 9.1.1 и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С до водного остатка (-30 куб. см), внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Колбу ополаскивают 20 куб. см дистиллированной воды, которую также переносят в делительную воронку. Вносят в воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают до растворения соли, добавляют 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, переносят в мерный цилиндр вместимостью 100 куб. см с пришлифованной пробкой, фильтруя через слой безводного сульфата натрия толщиной 1,5 см, помещенный на бумажном фильтре "красная лента" в конусной воронке.

Объединенный в мерном цилиндре гексановый экстракт перемешивают. Измеряют объем, 1/2 его часть (эквивалентную 5 г семян) переносят в новую делительную воронку вместимостью 150 - 200 куб. см. Вносят 40 куб. см ацетонитрила, насыщенного гексаном, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в колбу для упаривания. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 40 и 30 куб. см ацетонитрила, насыщенного гексаном.

Объединенный ацетонитрильный экстракт упаривают досуха при температуре не выше 40° и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.1.3.

9.1.3. Очистка экстракта на колонке с флорисилом

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. п. 9.1.2 или 9.2.1, растворяют в 3 куб. см гексана, помещая на ультразвуковую баню на 30 - 60 сек., и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.5. Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку 50 куб. см гексана, элюат отбрасывают. Альфа-циперметрин элюируют с колонки 50 куб. см смеси гексан - этилацетат (95:5, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С, остаток в колбе растворяют 2,5 куб. см гексана и анализируют содержание альфа-циперметрина по п. 9.3.

9.2.1. Экстракция

Образец масла массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, вносят 50 куб. см ацетонитрила, подогретого на водяной бане до 30 °С. Смесь переносят в делительную воронку вместимостью 150 - 250 куб. см. Колбу ополаскивают 50 куб. см гексана, раствор также переносят в делительную воронку, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой осторожно декантируют в мерный цилиндр вместимостью 250 куб. см. Экстракцию альфа-циперметрина повторяют еще дважды порциями ацетонитрила по 50 куб. см. Объединенный экстракт, помещенный в мерный цилиндр, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/2 его часть (эквивалентную 5 г масла) переносят в круглодонную колбу вместимостью 200 - 250 куб. см. Растворитель упаривают при температуре не более 35 °С до маслянистого остатка, подвергают очистке по п. 9.1.3.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Газовый хроматограф "Цвет 800", снабженный детектором электронного захвата ионов.

Колонка стеклянная 1 м внутренним диаметром 2 мм, заполненная 1% ХЕ-60 + 1% SF-96 на Хромосорбе WHP (100 - 200 меш).

Температура термостата колонки: 230 °С.

Скорость газа (азот): 35 куб. см/мин.

Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.

Ориентировочное время выхода альфа-циперметрина: 225 сек.

Образцы, дающие пики, большие чем градуировочный раствор альфа-циперметрина с концентрацией 0,1 мкг/куб. см, разбавляют гексаном.

Содержание альфа-циперметрина в пробе (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где:

А - концентрация альфа-циперметрина, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

К = 2, с учетом объема, экстракта, взятого для анализа;

m - масса анализируемого образца, г.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,005 мг/кг" <*>

--------------------------------

<*> 0,005 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора" (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана), Роспотребнадзор.