"МУК 4.1.2049-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций глифосата в атмосферном воздухе населенных мест методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Роспотребнадзором 10.04.2006)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в атмосферном воздухе массовой концентрации глифосата в диапазоне 0,032 - 0,32 мг/куб. м.

Глифосат - действующее вещество препарата ТОРНАДО, ВР (360 г/л).

ЗАО Фирма "Август", Россия.

N-(фосфонометил)-глицин (ИЮПАК).

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Область применения препарата

Глифосат - системный гербицид сплошного действия из группы ингибиторов биосинтеза ароматических аминокислот. Препарат проникает в ткани обработанных растений, передвигается с током ассимилятов и оказывает фитотоксическое действие. Применяются в виде изопропиламинной соли для уничтожения злаковых и широколистных сорняков, в том числе с глубоко укореняющейся корневой системой, в посевах сельскохозяйственных культур, в садах и виноградниках, на пастбищах, откосах оросительных и осушительных каналов, промышленных территориях, а также для борьбы с кустарниками в лесных насаждениях. Помимо этого, глифосат обладает способностью вызывать десикацию ряда культур, таких как подсолнечник, гречиха, соя и др.

Ориентировочно безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в атмосферном воздухе населенных мест - 0,04 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения концентраций глифосата выполняют методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД) после его дериватизации в метилпроизводное.

Концентрирование глифосата из воздуха осуществляют на аэрозольные фильтры АФА-ВП-20, экстракцию вещества с фильтров проводят смесью этанол - вода.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: получение N-нитрозо-N-метилмочевины (при необходимости), раствора диазометана, приготовление градуировочных растворов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

В мерную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 20 г гидроксида натрия, растворяют в 25 - 30 куб. см дистиллированной воды, доводят водой до метки.

В отсутствии коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.

Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1 куб. дм, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 куб. см воды и кипятят 3 ч с обратным холодильником на водяной бане. Раствор в колбе охлаждают до комнатной температуры и добавляют в него 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом, содержащим NaCl, до 0 °С и медленно при перемешивании вливают в смесь 600 г льда и 60 куб. см концентрированной серной кислоты, помещенную в стакан вместимостью 2 куб. дм, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью. Выпавшие кристаллы нитрозометилмочевины немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.

Внимание! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, так как под действием света и тепла она может взорваться.

Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В коническую колбу на 100 куб. см вносят 20 куб. см 40%-ного раствора KOH и 50 куб. см диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 - 5 °С. В охлажденную смесь порциями при перемешивании на магнитной мешалке или путем встряхивания вносят 5 г нитрозометилмочевины. Реакционную смесь выдерживают на холоду 10 минут. Затем эфирный слой сливают в чистую коническую колбу вместимостью 100 куб. см, добавляют 10 - 15 гранул KOH и колбу оставляют в бане со льдом на 2,5 - 3 часа для осушения раствора.

Раствор диазометана в эфире годен к употреблению при хранении в холодильнике в течение 1 - 2 суток. При хранении сосуды с диазометаном нельзя плотно закрывать!

7.4.1. Исходный раствор производного глифосата для градуировки (концентрация глифосата 1 мг/куб. см). В круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 0,05 г глифосата, вносят 5 куб. см трифторуксусной кислоты, подсоединяют обратный холодильник, перемешивают при нагревании (50 °С) до полного растворения осадка (15 - 20 мин.). Вносят 5 куб. см трифторуксусного ангидрида, выдерживают при 50 °С еще 10 мин. Охлаждают до комнатной температуры, растворитель отдувают током азота или теплого воздуха досуха. Остаток тотчас растворяют в 5 куб. см бензола, прибавляют 5 куб. см раствора диазометана, выдерживают 30 мин. при комнатной температуре. Вновь отдувают растворитель (помещая колбу на слабо подогретую водяную баню) до 1 - 2 куб. см. Остаток переносят в мерную колбу вместимостью 50 куб. см, доводят бензолом до метки (порциями по 10 - 15 куб. см, предварительно ополаскивая растворителем реакционную колбу). Раствор хранится в холодильнике не более месяца.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2. Раствор N 1 производного глифосата для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 5 куб. см исходного раствора с концентрацией глифосата 1 мг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют бензолом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7.4.3. Рабочие растворы N 2 - 5 производного глифосата для градуировки (концентрация глифосата 0,5 - 5,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,5 и 5,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки бензолом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией глифосата 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 5-ти дней.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х сек.) от концентрации глифосата в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.

В испаритель хроматографа вводят по 2 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика действующего вещества.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х градуировочных растворов различной концентрации. Если значения площадей отличаются более чем на 15% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.5.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Хроматограф газовый "Кристалл-2000М" с термоионным детектором.

Колонка капиллярная НР-50 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Программированный нагрев колонки: 110 °С, от 110 до 180 °С со скоростью 10 град./мин., 180 °С (5 мин.).

Скорость воздуха 200 куб. см/мин.; водорода 14,5 куб. см/мин.; газа 3 (азот) 30 куб. см/мин.

Скорость газа 1 (азот): 30 куб. см/сек., давление 105,21 кПа, поток 1,2983 куб. см/мин., деление потока 1:7,702; сброс 10 куб. см/мин.

Хроматографируемый объем: 2 куб. мм.

Ориентировочное время удерживания производного глифосата: 8 мин. 53 сек.

Линейный диапазон детектирования: 1 - 10 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор глифосата с концентрацией 5,0 мкг/куб. см, разбавляют бензолом.

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 ОПА "Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест".

Воздух с объемным расходом 4 - 10 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации глифосата на уровне 0,8 ОБУВ необходимо отобрать 80 куб. дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4 °С - 30 дней.

Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 100 куб. см, смачивают 0,5 куб. см этилового спирта, заливают 20 куб. см дистиллированной воды и помещают на встряхиватель на 15 минут. Растворитель сливают в грушевидную колбу, далее фильтр обрабатывают дважды смесью этанол - вода (1:1, по объему) порциями по 20 куб. см, выдерживая на встряхивателе по 10 минут.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 45 °С досуха. Для полного удаления влаги в колбу вносят 3 - 4 куб. см ацетонитрила, вновь упаривают. К сухому остатку прибавляют 2 куб. см трифторуксусной кислоты, к колбе присоединяют обратный холодильник, помещают ее на водяную баню (50 °С) на 10 мин., периодически перемешивая. Вносят 5 куб. см трифторуксусного ангидрида, выдерживают при 50 °С еще 10 мин. Охлаждают до комнатной температуры, растворитель отдувают током азота или теплого воздуха досуха. Остаток тотчас растворяют в 2 куб. см бензола, прибавляют раствор диазометана до устойчивой желтой окраски (около 5 куб. см), выдерживают 30 мин. при комнатной температуре. Вновь отдувают растворитель (помещая колбу на слабо подогретую водяную баню) до 0,5 - 1 куб. см. Остаток переносят в градуированную пробирку вместимостью 5 - 10 куб. см, доводят объем бензолом до 5 куб. см (порциями по 1,5 - 2 куб. см, предварительно ополаскивая растворителем реакционную колбу).

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию глифосата в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

Массовую концентрацию глифосата в пробе атмосферного воздуха Х, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:

Примечание: Идентификация и расчет концентрации глифосата в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора".