"МУК 4.1.1971-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств хлорпрофама в картофельных чипсах методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 21.04.2005)

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в картофельных чипсах массовой концентрации хлорпрофама в диапазоне 0,04 - 0,4 мг/кг.

Изопропил 3-хлоркарбанилат (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса: 213,7.

Химически чистый хлорпрофам представляет собой бесцветный порошок.

Точка плавления: 41,4 °C (чистый продукт); 38,5 - 40 °C (технический продукт).

Растворимость в воде - 89 мг/куб. дм (при 25 °C), хорошо растворим в большинстве органических растворителей: спиртах, кетонах, эфирах, хлорированных и ароматических углеводородах. Умеренно растворим в минеральных маслах.

Область применения препарата

Хлорпрофам - системный гербицид и регулятор роста растений из группы карбаматов, являющийся ингибитором деления клеток (ингибитор формирования микротубул). Рекомендуется в качестве регулятора роста растений для применения в клубнехранилищах картофеля, предназначенного для изготовления чипсов, с целью предотвращения прорастания клубней.

Гигиенические нормативы

МДУ в очищенном картофеле, предназначенном для изготовления чипсов, - 0,1 мг/кг.

Предел обнаружения: 0,04 мг/кг

Диапазон определяемых концентраций: 0,04 - 0,4 мг/кг

Среднее значение извлечения: 94,12%

Стандартное отклонение: 2,23%

Доверительный интервал среднего результата: +/- 4,6%.

Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД) после экстракции из анализируемой пробы ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонке оксидом алюминия.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания картофеля.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.2.1. Исходный раствор хлорпрофама для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г хлорпрофама, растворяют в 50 - 70 куб. см ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 6-ти месяцев.

Растворы N 1 - 4 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.2.2. Рабочие растворы N 1 - 4 хлорпрофама для градуировки (концентрация 1,0 - 10 мкг/куб. см)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.2.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 1 - 4 с концентрацией хлорпрофама 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более месяца.

Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения хлорпрофама из исследуемых образцов.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации хлорпрофама в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 1 - 4.

В испаритель хроматографа вводят по 2 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г оксида алюминия в 15 - 20 куб. см этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. После этого колонка готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 1 куб. см раствора N 4 для градуировки с концентрацией хлорпрофама 10 мкг/куб. см (п. 7.2.2), растворитель упаривают досуха, добавляют 2 куб. см этилацетата, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.4. Промывают колонку 50 куб. см этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетона, анализируют на содержание хлорпрофама по п. 9.4.

Фракции, содержащие хлорпрофам, объединяют и вновь анализируют.

Рассчитывают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения хлорпрофама следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 26318-84 "Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб" и ГОСТ 28741-90 "Продукты питания из картофеля. Приемка, подготовка проб и методы испытаний".

Отобранные пробы, герметично упакованные в полиэтиленовые пакеты, хранят в темноте при температуре 4 - 6 °C не более месяца.

Перед анализом образцы чипсов измельчают.

Образец измельченных чипсов массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 - 300 куб. см, вносят 70 куб. см ацетонитрила и помещают на встряхиватель на 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу вместимостью 250 куб. см. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см ацетонитрила и встряхивая каждый раз по 15 минут.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки еще дважды, используя по 30 куб. см гексана. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см и подвергают очистке по п. 9.2.

Экстракт, полученный по п. 9.1 и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 40 °C. Остаток растворяют в 5 куб. см ацетона, добавляют 50 куб. см дистиллированной воды, обмывают стенки колбы и переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Колбу ополаскивают еще раз 50 куб. см дистиллированной воды, которую также переносят в делительную воронку.

Вносят в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают для растворения соли, добавляют 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, и помещенную в круглодонную колбу, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 2-х куб. см этилацетата и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.4. Колбу обмывают трижды порциями этилацетата по 2 куб. см, которые также наносят на колонку. Хлорпрофам элюируют с колонки 25 куб. см этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в сек., собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 40 °C. Остаток в колбе растворяют 1 куб. см ацетона и анализируют на содержание хлорпрофама по п. 9.4.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Газовый хроматограф "Кристалл-2000М", снабженный термоионным детектором.

Колонка капиллярная НР-50 длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: 350 °C

испарителя: 200 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 110 °C, выдержка 1 минута; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 200 °C, выдержка 7 минут; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 250 °C, выдержка 5 минут.

Скорость воздуха 200 куб. см/мин.; водорода - 13,4 куб. см/мин.; газа 3 (азот) - 35 куб. см/мин.

Скорость газа 1 (азот): 20 см/сек., давление 70,139 кПа, поток 0,7668 куб. см/мин., деление потока 1: 6,520, сброс 5 куб. см/мин.

Хроматографируемый объем: 2 куб. мм.

Ориентировочное время выхода хлорпрофама: 10 мин.

Линейный диапазон детектирования 2 - 20 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор хлорпрофама с концентрацией 10 мкг/куб. см, разбавляют ацетоном.

Содержание хлорпрофама в пробе рассчитывают по формуле:

где:

X - содержание хлорпрофама в пробе, мг/кг;

А - концентрация хлорпрофама, найденная по градуировочному графику, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Рогачева С.К. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана); Брагина И.В. (Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора).