"МУК 4.1.1609-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по спектрофотометрическому измерению концентрации целлюлазы в воздухе рабочей зоны"
(утв. Минздравом России 29.06.2003)

Утверждены Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, Председателем Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко в июне 2003 г.

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (сборник 38) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Методические указания разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и меньше их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в ГН 2.2.5.686-98 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.687-98 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Ферментный препарат целлюлаза (К 3.2.1.4 - бета-1,4-глюкан-4-глюканогидролаза).

М. м. 65000.

Целлюлаза - порошок сероватого цвета со слабым запахом дрожжей. Растворима в воде.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

Обладает общетоксическим действием. Мало токсична при различных путях воздействия на организм. При ингаляции пыль целлюлазы вызывает раздражение верхних дыхательных путей.

ПДК в воздухе рабочей зоны - 2 мг/куб. м (аэрозоль).

Метод основан на количественном определении восстанавливающих эквивалентов, в основном целлобиозы, образующихся при гидролизе целлюлозы целлюлазой; используется способность калия железосинеродистого менять свой цвет при окислительно-восстановительной реакции с восстанавливающими эквивалентами. Измерение производят при длине волны 390 - 420 нм (оптимальная длина волны 405 нм). Субстратом для целлюлазы служит бумага для физико-химических анализов, представляющая собой практически чистую целлюлозу. Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр АФА-ВП-10.

Нижний предел измерения содержания целлюлазы в анализируемой пробе - 3,2 мкг.

Нижний предел измерения концентрации в воздухе (при отборе 16 л воздуха) - 1,0 мг/куб. м.

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе 1 - 10 мг/куб. м.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, не более 1,5 часов.

Определению мешают хондрозин, мелибиоза, мальтоза, лактоза, ксилобиоза, гиалобиуроновая кислота, мурамовая кислота.

- Колориметр фотоэлектрический лабораторный (фотоэлектроколориметр) по ГОСТ 12083, обеспечивающий измерения в интервалах длин волн 390 - 420 нм (оптимум 405 нм).

- Весы лабораторные ВЛР-200, ГОСТ 24104-88Е.

- Аспирационное устройство, модель 822, ТУ 64-1-862-72.

- Фильтродержатель, ТУ 96-72-05-77.

- Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.

- Баня водяная с температурой терморегулирования 100 +/- 0,5 °C.

- Термостат или ультратермостат, обеспечивающий температуру нагрева 37 +/- 0,2 °C.

- Секундомер, ГОСТ 5072-79.

- Стаканчики СВ-19/9 и 24/10, ГОСТ 25336-82Е.

- Стаканы вместимостью 25 мл, ГОСТ 25336-82Е.

- Колбы 50, 100, 200, 500, 1000 мл, ГОСТ 1770-74Е.

- Пипетки 1 и 10 мл, ГОСТ 29227-91.

- Пробирки П1-14-120 ХС или П1-16-150, ГОСТ 25336-82Е.

- Целлюлаза, целлюлолитическая активность 1000 ед./г, ТУ 9231-008-05800805-93.

- Бумага для медицинских и физико-химических анализов в качестве субстрата, ТУ 13-7308001-778-89.

- D-глюкоза, ГОСТ 6086-79.

- Ацетатный буферный раствор, pH 4,7, готовый, ГОСТ 4919.2.

- Натрий углекислый, ГОСТ 83-79.

- Калий железосинеродистый, ГОСТ 4206-75.

- Вода дистиллированная, ГОСТ 6709.

Все реактивы должны быть марки х.ч. или ч.д.а.

1. Приготовление стандартного раствора целлюлазы, 16 мкг/мл.

8,0 мг целлюлазы помещают в стеклянный стаканчик, тщательно растирают стеклянной палочкой с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. Окончательно полученный раствор разводят в 10 раз. Стандартный раствор готовят в день проведения анализа.

2. Приготовление растворов целлюлазы для построения градуировочного графика.

Для градуировочного графика растворы приготовляют согласно табл.

3. Приготовление раствора калия железосинеродистого, 0,60 мг/мл.

6,00 г углекислого натрия растворяют в 200 мл дистиллированной воды и переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл.

Затем в эту же колбу добавляют 0,60 г калия железосинеродистого. Объем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Раствор хранят при комнатной температуре в темном месте в течение 2-х месяцев.

1. Гидролиз целлюлазы.

Полоску бумаги массой 100,0 мг складывают гармошкой, помещают в пробирку и заливают 2 мл готового ацетатного буферного раствора. Пробирку помещают на водяную баню с температурой 37 +/- 0,2 °C и прогревают в течение 10 мин. Затем в пробирку добавляют 2 мл пробы, содержащей известное количество целлюлазы (концентрации целлюлазы указаны в таблице), и гидролизуют в течение 15 минут (точно).

Аналогично приготавливают холостую пробу, где вместо раствора, содержащего целлюлазу, добавляют 2 мл дистиллята.

2. Проведение цветной реакции.

После этого из пробирок, содержащих опытную и холостую пробы, в другие пробирки отбирают по 0,2 мл реакционной смеси, приливают по 6 мл раствора калия железосинеродистого, смесь прогревают при температуре 100 °C в течение 10 мин. на водяной бане, затем охлаждают до комнатной температуры.

3. Проведение оптических измерений.

Оптическую плотность определяют на ФОКе при длине волны 405 нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 5,0 мм.

Проверку калибровочного графика проводят при смене реактивов, оборудования или приборов и не реже чем 1 раз в месяц.

Отбор проб воздуха.

Для определения 0,5 ПДК целлюлазы необходимо отобрать 16 л воздуха. Пробы воздуха с объемным расходом 5 л/мин. отбирают на фильтры АФА-ВП-10. Срок хранения отобранных проб в холодильнике - до 1 суток.

Экстракция целлюлазы с фильтра.

Фильтр с отобранной пробой, содержащей целлюлазу из воздуха рабочей зоны, помещают в стакан и приливают 5,0 мл дистиллированной воды. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин. и сливают в пробирку. Аналогичным образом проводят повторную экстракцию с фильтра и объединяют растворы. Общий объем элюата составляет 10,0 мл.

Если значения оптической плотности выходят за пределы рабочей зоны градуировочного графика целлюлозы (Д = 0,060...0,600), то опыт необходимо повторить с раствором, имеющим большее или меньшее содержание ферментного препарата.

Определение содержания целлюлазы в анализируемой пробе.

где:

а - содержание целлюлазы в объеме пробы, взятом для анализа (мкг);

б - объем анализируемой пробы (мл);

в - общий объем элюата с воздушного фильтра (мл);

V - объем воздуха (л), отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям (см. Приложение 1).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °C и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле:

Белая магнезия

Бромгексин

Бура

Гидразинобензол солянокислый

Глибенкламид

Диэтиламинопропиламин

Иминодибензил

Лидокаин

Метаран

МЦ-100

Масло "Турбомас"

Неопентилгликоль

Нимодипин

Нитрендипин

Нитроглицерин

Оксипропилметилцеллюлоза

Ондансетрон

Ранитидин гидрохлорид

Реагент ААК или Таллактам

СМБА

Сульфаметоксазол

Тамоксифен основание

Тамоксифен цитрата

Тиаприд

Триметоприм

Хладон-14

Ципрофлоксацин гидрохлорида моногидрат

Экосорб

Эналаприла малеат

Этиниловый спирт

Оперативный контроль погрешности (точности) проводят в одинаковых условиях, т.е. результаты анализа получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

При осуществлении ВОК воспроизводимости отбирают две пробы, объем которых равен объему, необходимому для проведения анализа по методике, и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа, используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. В работе должны участвовать два аналитика.

При превышении норматива ВОК воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.