"МУК 4.1.1449-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ацифлуорфена в почве, воде, зерне и масле сои хроматографическими методами. Методические указания"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены с 30 июня 2003 г.

5. Введены впервые.

Фирма-производитель: "BASF" (Германия).

Торговое название препарата: Блазер 2С.

Название действующего вещества по ИСО: ацифлуорфен, ацифлуорфен-натрий.

Название действующего вещества по ИЮПАК:

2-нитро-5-(4-трифторметил-2-хлорфенокси)бензойная кислота; 2-нитро-5-(4-трифторметил-2-хлорфенокси)бензоат натрия.

Структурные формулы: (не приводятся).

Физико-химические свойства ацифлуорфена

Молекулярная масса: 361,7.

Плотность: 1,546 г/куб. см.

Агрегатное состояние: твердое вещество.

Цвет: светло-коричневый.

Температура плавления: 142 - 160 °С.

Летучесть (давление паров): < 0,01 мПа (при 20 °С).

Растворимость в воде: 120 мг/л (23 - 25 °С).

Растворимость в органических растворителях: (г/кг при 25 °С) ацетон - 600, этанол - 500, дихлорметан - 50, ксилол, керосин < 10.

Молекулярная масса: 383,6.

Плотность: 0,4 - 0,5 г/куб. см (насыпная плотность).

Температура плавления: 274 - 278 °С (с разложением).

Летучесть (давление паров): < 0,01 мПа (при 25 °С).

Растворимость в воде (г/100 г при 25 °С): незабуференной - 62,07, при рН 7 - 50,81, при рН 9 - 60,71.

Устойчивость: устойчив > 2 лет при 20 - 25 °С.

Период полуразложения в почве: от 108 сут. (в песчаной почве) до 200 сут. (в суглинистой почве). В воде ацифлуорфен стабилен в темноте, на свету быстро разлагается фотогидролитически с периодом полураспада около 2 ч.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ОДК в почве - 0,2 мг/кг;

ПДК в воде - 0,002 мг/л;

МДУ в семенах сои - 0,1 мг/кг, в масле сои - 0,02 мг/кг.

Препарат запрещается применять в пределах санитарной зоны вокруг рыбохозяйственных водоемов.

Область применения

Препарат Блазер 2С (24% д.в.) на основе ацифлуорфена проходит перерегистрацию в России в качестве гербицида для подавления двудольных сорняков в посевах сои в фазу 2 - 4 листьев культуры (однократная обработка) при норме расхода при опрыскивании 1,5 - 2,5 л/га.

Разрешено применение для борьбы с сорняками в посевах сои смесей ацифлуорфена с бентазоном.

Методика основана на определении ацифлуорфена методами тонкослойной хроматографии с применением пластинок "Силуфол" и газожидкостной хроматографии с использованием детектора постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР) после извлечения ацифлуорфена из исследуемой пробы органическими растворителями, очистке экстракта с помощью высокоскоростного центрифугирования с охлаждением. Очищенный экстракт анализируется непосредственно (тонкослойная хроматография) или метилируется диазометаном с образованием метилового эфира ацифлуорфена (газожидкостная хроматография).

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен и может применяться для определения остаточных количеств ацифлуорфена в воде, почве и растительном материале сои (зерно и масло), обрабатываемых другими пестицидами, в частности, фенилмочевинными и симмтриазиновыми гербицидами.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице.

Готовую насадку (3% OV-225 на Супелкопорте или 5% ХЕ-60 на Хроматоне-N-AW-DMCS) насыпают в колонку порциями с уплотнением под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют (кондиционируют) в токе азота (2 - 3 мл/мин.) при температуре 260 и 230 °С соответственно в течение 10 - 12 ч.

В двугорлую круглодонную колбу, снабженную обратным холодильником и капельной воронкой на 10 мл, помещают 5 г N-метил-N-нитрозо-р-толуолсульфамида или N-метил-N-нитрозомочевины, 8 мл диэтилового эфира и 8 мл метанола. К выходу обратного холодильника присоединяют газоотводную трубку, конец которой помещают в цилиндр с 50 мл диэтилового эфира. В капельную воронку помещают 3 мл 20%-го раствора NaOH. Щелочь по каплям осторожно добавляют в круглодонную колбу. Выделяющийся газообразный диазометан насыщает эфир до появления ярко-желтого окрашивания реакционной смеси. Время насыщения диэтилового эфира диазометаном около 20 мин.

В мерной колбе на 50 мл взвешивают 50 мг аналитического стандарта ацифлуорфена. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1000 мкг/мл). Раствор стабилен при хранении в холодильнике не более 3 месяцев.

Методом последовательного разбавления ацетоном раствора N 1 готовят стандартные растворы ацифлуорфена с концентрацией 0,025; 0,05; 0,10; 0,25 и 0,50 мкг/мл. В конические пробирки со шлифом помещают по 1 мл указанных стандартных растворов и испаряют досуха. Приливают по 1 мл раствора диазометана в диэтиловом эфире и оставляют на 15 мин. при комнатной температуре, эфир выпаривают в токе воздуха и сухие остатки растворяют в 1 мл гексана. Полученные растворы используют для абсолютной калибровки.

При оценке полноты открываемости ацифлуорфена в модельных матрицах используют ацетоновые растворы гербицида соответствующей концентрации.

Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл растворов метилированных диазометаном ацифлуорфена с концентрацией 0,025; 0,05; 0,10; 0,25 и 0,50 мкг/мл. Проводят не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации и находят среднее значение высоты хроматографического пика.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации метилового эфира ацифлуорфена в растворе в мкг/мл.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР от 21.08.79 N 2051-79.

Пробы воды в стеклянной или инертной полиэтиленовой таре (полиэтилен высокого давления) хранят при температуре 0 - 4 °С в течение не более 7 суток, для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при -18 °С. Отобранные пробы зерна сои подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при температуре 0 - 4 °С. Пробы масла сои хранят в холодильнике при 0 - 4 °С и используют для анализа без предварительной подготовки. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно сои измельчают на лабораторной мельнице.

2.5.1.1. Тонкослойная хроматография.

1) 100 мл анализируемой воды помещают в колбу ротационного вакуумного испарителя и выпаривают досуха. Препарат извлекают небольшими порциями (0,1 - 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.

2) К 100 мл анализируемой воды прибавляют 50 мл этилацетата и ставят на аппарат для встряхивания на 20 - 30 мин. Этилацетат сливают, прибавляют его новую порцию (25 мл) к воде и снова встряхивают на качалке. Эту операцию повторяют еще раз и через делительную воронку отделяют этилацетатные экстракты. Последние проводят через безводный сернокислый натрий, переносят в колбу для отгонки растворителя, упаривают и хроматографируют.

Примечание. При работе вторым способом иногда при сильном встряхивании образуются стойкие эмульсии, которые можно устранить добавкой небольшого количества (до 1 мл) этилового спирта.

2.5.1.2. Газожидкостная хроматография.

Анализируют метиловый эфир ацифлуорфена на газожидкостном хроматографе (п. 2.7).

2.5.2.1. Тонкослойная хроматография.

100 г воздушно-сухой почвы, предварительно просеянной через сито, заливают водой (до покрытия пробы) и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на два часа. Воду отфильтровывают через воронку Бюхнера. Полученную водную вытяжку выпаривают досуха, а препарат извлекают небольшими порциями (по 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.

2.5.2.2. Газожидкостная хроматография.

Далее процедура анализа ацифлуорфена в почве аналогична описанной выше в п. 2.5.1.2.

2.5.3.1. Тонкослойная хроматография.

1) К 5 г сои (грубый помол с частицами в 1 - 2 мм) добавляют оводненный ацетон (60%), оставляют на ночь или ставят на качалку на 30 мин. Отфильтровывают через воронку Бюхнера и ставят на выпаривание до маслянистого остатка. Остаток обмывают 10 - 15 мл 1%-го раствора NaOH. Эту манипуляцию повторяют дважды. Полученный щелочной раствор помещают в делительную воронку и дважды энергично встряхивают с гексаном. Гексан отбрасывают, а раствор щелочи подкисляют соляной кислотой до нейтральной реакции. Из последнего препарат извлекают этилацетатом по 20 мл трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, проводят через безводный сернокислый натрий и выпаривают досуха, затем наносят на пластинку.

2) К 5 г сои (грубый помол с частицами в 1 - 2 мм) добавляют воду и равное количество коагулирующей смеси: 5 г хлорида аммония растворяют в 10 мл дистиллированной воды, приливают 10 мл 85%-й ортофосфорной кислоты и доводят дистиллированной водой до 1 л. Раствор ставят на качалку на 30 мин., затем отфильтровывают, доводят до нейтральной реакции 10%-м раствором NaOH и извлекают этилацетатом по 25 мл трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, высушивают безводным сернокислым натрием и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе до 0,1 мл. Препарат извлекают небольшими порциями этилацетата и наносят на пластинку.

2.5.3.2. Газожидкостная хроматография.

Измельченную растительную пробу (зерно - 5 г) помещают в коническую колбу на 250 мл и приливают 50 мл 95%-го водного метанола, подщелачивают 20% NaOH до рН 7 - 8. Ацифлуорфен экстрагируют при перемешивании в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) в цилиндр на 100 мл. Экстракцию повторяют с 50 мл растворителя в течение 30 мин. Экстракты объединяют, отбирают аликвотную порцию объемом 50 мл, которую разбавляют водой до соотношения метанол:вода = 2:1. Затем при температуре 45 °С, используя ротационный вакуумный испаритель, выпаривают до получения водного остатка, который подкисляют 1 М НСl до рН 2 - 3, помещают в пластиковые тубы и центрифугируют в течение 25 мин. при 20 тыс. об./мин. с охлаждением до 0 °С.

Далее процедура анализа ацифлуорфена в зерне сои аналогична описанной выше в п. 2.5.1.2.

2.5.4.1. Газожидкостная хроматография.

Пробу количественно переносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием ацифлуорфена (10 - 20 мкг). Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, предварительно наполненную растворителем. Перед каждой хроматограммой растворитель следует менять на свежеприготовленный. Подвижной фазой для ацифлуорфена является смесь гексана с ацетоном в соотношении 59:41 или изопропиловый спирт с бензолом - 25:75. После поднятия линии фронта на 12 - 13 см пластинку из камеры вынимают, высушивают на воздухе до полного удаления растворителя.

Проявление зон локации ацифлуорфена на хроматограмме производят одним из указанных проявителей.

Ацифлуорфен на пластинках "Силуфол" проявляется в виде двух пятен: Rf верхнего пятна - 0,45; нижнего - чуть отделяется от пятна.

Примечание. В случае проб сои можно использовать многоступенчатую (3 - 4 раза) вытеснительную хроматографию (хроматограмму опускают в ту же подвижную фазу после просушивания и удлинения фронта разгона), чтобы отгонять ближе к фронту нежелательные компоненты.

Стальная колонка с Supelcoport 3% OV-225 (80 - 100 меш), с внутренним диаметром 2 мм и длиной 1,8 м;

температура колонки: 220 °С;

температура детектора: 350 °С;

температура инжектора: 250 °С;

газ-носитель - азот ос.ч.;

скорость тока азота - 40 мл/мин.;

тип детектора - детектор постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР);

скорость движения ленты самописца - 20 см/ч;

чувствительность самописца - 5 мВ;

объем вводимой пробы - 2 мкл;

время удерживания метилового эфира ацифлуорфена - 5 мин.;

линейный диапазон детектирования - 0,01 - 1,00 нг.

Альтернативные условия:

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором (ДЭЗ);

капиллярная кварцевая колонка НР-5 (Crosslinked 5% РН ME Siloxane), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм;

температура колонки: 240 °С;

температура детектора: 360 °С;

температура инжектора: 280 °С;

газ 1 - тип регулятора расхода газа РРГ-11, давление 82,58 кПа;

газ 2 (гелий) - 50 мл/мин., режим нормальный, расход 0,5 мл/мин., сброс 1:100;

газ 3 (азот, поддув детектора) - 30 мл/мин.

Продувка детектора и испарителя проводится при скорости 60 мл/мин. в течение 2 мин. при температуре колонки, равной 230 °С.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют гексаном.

Содержание ацифлуорфена в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

где:

А - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

m - навеска пробы, г;

Х - содержание ацифлуорфена в пробе, мг/кг или мг/л.

Содержание ацифлуорфена в пробах воды, почвы, зерне, масле сои рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами и электронагревательными приборами.

Н.В. Бажанова, М.Г. Алтунян, Ж.А. Арутюнян.

Научно-исследовательский институт защиты растений. Вода, почва, зерно сои (тонкослойная хроматография), 1984 г.

Ю.Я. Спиридонов, С.Г. Жемчужин, Г.Е. Ларина.

143050, Московская обл., Одинцовский р-он, п/о Большие Вяземы, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии Россельхозакадемии, отдел гербологии. Вода, почва, зерна, масло сои.

Телефон/факс: (096)33-4-11-07.

E-mail: galina_larina@vniif.rosmail.com.

В.А. Калинин, О.И. Рыбакова.

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева, кафедра химических средств защиты растений. Масло сои (капиллярная газожидкостная хроматография), 2000 г.