"МУК 4.1.3313-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации 4-гидрокси-3-[1,2,3,4-тетрагидро-3-[4-(4-трифторметил-бензоилокси)фенил]-1-нафтилкумарина, смесь (1R, 3R)- и (1R, 3S)-изомеров (флокумафен) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 24.12.2015)

Сборник методических указаний "Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 57) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и является обязательным при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.016-79 "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ" с изм. 1, ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" с изм. 1, ГОСТ Р 8.563-09 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений", ГОСТ Р ИСО 5725-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.2308-07 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и дополнениях к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Методические указания подготовлены коллективом авторов ФГБНУ "Научно-исследовательский институт медицины труда" (Л.Г. Макеева - руководитель, Н.С. Горячев, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Н.Л. Полуэктова).

Разработаны НИЦ "Экос" ООО "Алгама" (В.А. Смирнов).

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 01.00225/205-78-11.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для измерения массовой концентрации флокумафена в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,0025 - 0,02 мг/м³.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Флокумафен

Эмпирическая формула: C₃₃H₂₅F₃O₄.

Молекулярная масса: 542,6.

Регистрационный номер CAS 90035-08-8.

Флокумафен (смесь (1R, 3R)- и (1R, 3S)-изомеров) - белое кристаллическое вещество, без запаха, температура плавления 190 °C, температура разложения 280 °C, плотность 1,4 г/см³, нерастворим в воде, гексане, эфире, хорошо растворим в ацетоне, хлороформе, этаноле, ацетонитриле.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

Флокумафен является родентицидом антикоагулянтного типа (нарушает свертываемость крови, повышает проницаемость сосудов).

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) флокумафена в воздухе рабочей зоны 0,005 мг/м³.

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с прописью методика обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации флокумафена с метрологическими характеристиками, не превышающими значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

Измерение массовой концентрации флокумафена выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуориметрическим детектором. Метод основан на разделении изомеров флокумафена на хроматографической колонке с сорбентом на основе химически модифицированных кремнеземов с диаметром пор 110А и размером частиц 18 мкм с последующей регистрацией разделенных компонентов с помощью флуориметрического детектора. После разделения компонентов определяется смесь (сумма) изомеров. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации вещества.

Отбор проб проводят с концентрированием на бумажный обеззоленный фильтр (медленно фильтрующий).

Нижний предел измерений содержания флокумафена в анализируемом объеме пробы - 0,0048 мкг.

Нижний предел измерения концентрации флокумафена в воздухе 0,0025 мг/м³ (при отборе 1 920 дм³ воздуха).

Измерению не мешают сопутствующие вещества: триэтаноламин, триэтиленгликоль.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими и метрологическими характеристиками.

Примечание. Допускается применение реактивов с более высокой квалификацией.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76 и ГОСТ 12.1.005-88 (с изменением 1).

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускается специалист, имеющий высшее образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедший обучение и владеющий техникой анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), освоивший метод анализа в процессе тренировки и уложившийся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят при следующих условиях:

- температура воздуха (20 +/- 5) °C;

- атмосферное давление (84 - 106) кПа;

- относительная влажность воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1.1. Основной стандартный раствор флокумафена в ацетонитриле с массовой концентрацией 960,0 мкг/см³ готовят растворением (0,024 +/- 0,0001) г флокумафена в ацетонитриле в мерной колбе вместимостью 25 см³. Раствор устойчив в течение трех дней при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор N 1 с массовой концентрацией флокумафена 48,0 мкг/см³ готовят разбавлением 1,25 см³ основного стандартного раствора флокумафена ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 25 см³.

9.1.3. Стандартный раствор N 2 с массовой концентрацией флокумафена 96,0 мкг/см³ готовят разбавлением 2,5 см³ основного стандартного раствора флокумафена ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 25 см³.

9.1.4. Стандартный раствор N 3 с массовой концентрацией флокумафена 144,0 мкг/см³ готовят разбавлением 3,75 см³ основного стандартного раствора флокумафена ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 25 см³.

9.1.5. Стандартный раствор N 4 с массовой концентрацией флокумафена 192,0 мкг/см³ готовят разбавлением 5,0 см³ основного стандартного раствора флокумафена ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 25 см³.

9.1.6. Стандартный раствор N 5 с массовой концентрацией флокумафена 240,0 мкг/см³ готовят разбавлением 6,25 см³ основного стандартного раствора флокумафена ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 25 см³.

9.1.7. Стандартный раствор N 6 с массовой концентрацией флокумафена 360,0 мкг/см³ готовят разбавлением 9,4 см³ основного стандартного раствора флокумафена ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 25 см³.

Растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.8. Элюент A: 0,1%-й (об.) раствор уксусной кислоты: 0,5 см³ ледяной уксусной кислоты вносят в мерную колбу вместимостью 500 см³ и доводят до метки дистиллированной водой (pH 3,4 устанавливают с помощью pH-метра).

Элюент хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение месяца.

9.1.9. Элюент B: 2%-й (об.) тетрагидрофуран в ацетонитриле готовят в колбе вместимостью 500 см³: к 490,0 см³ ацетонитрила приливают 10,0 см³ тетрагидрофурана.

Элюент хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение месяца.

Подвижная фаза:

Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по эксплуатации.

Проверка пригодности хроматографической системы.

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняется следующее условие: относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика флокумафена, должно быть не более 2%.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость суммы площадей пиков изомеров флокумафена-1 и флокумафена-2 (приборные единицы) от содержания флокумафена в градуировочном объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки по шести сериям измерений, по пяти концентрациям в каждой серии следующим образом: на фильтры, помещенные в стаканчики, наносят по 0,1 см³ каждого стандартного раствора с массовой концентрацией 48,0; 96,0; 144,0; 192,0; 240,0 и 360,0 мкг/см³, что соответствует 4,8 мкг, 9,6 мкг, 14,4 мкг, 19,2 мкг, 24,0 мкг и 36,0 мкг. После чего фильтры подсушивают при комнатной температуре, затем заливают 5,0 см³ ацетонитрила и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают, раствор сливают в пробирку, а фильтр повторно заливают 5,0 см³ ацетонитрила и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают. Экстракты объединяют. Объем растворов доводят до 10,0 см³ ацетонитрилом.

Градуировочные растворы устойчивы в течение трех дней при хранении в холодильнике.

Инжектируют в хроматограф по 0,01 см³ каждого из градуировочных растворов, что соответствует 0,0048; 0,0096; 0,0144; 0,0192; 0,024 и 0,036 мкг флокумафена в хроматографируемом объеме градуировочных растворов (табл. 2).

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости суммы площадей пиков изомеров (приборные единицы) от содержания флокумафена в хроматографируемом объеме (мкг).

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с прописью методики.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

S_изм, S_гр - значение суммы площадей пиков изомеров (приборные единицы) флокумафена в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;

К_гр - норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением 1 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Одновременно отбирают две параллельные пробы.

Воздух с объемным расходом 80 дм³/мин аспирируют в течение 24 мин через фильтр, помещенный в фильтродержатель (снабженный металлической сеткой).

Для измерения ¹/₂ ОБУВ флокумафена необходимо отобрать 1 920 дм³ воздуха. При отборе измеряют расход, время, атмосферное давление, температуру воздуха.

Фильтры с отобранной пробой хранят в бюксах в холодильнике в течение недели.

После отбора пробы фильтр помещают в химический бюкс вместимостью 25 см³ и добавляют 5,0 см³ ацетонитрила, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 мин, затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс.

Фильтр повторно обрабатывают 5,0 см³ ацетонитрила, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 мин, снова тщательно отжимают и удаляют. Экстракты объединяют. Объем растворов доводят до 10,0 см³ ацетонитрилом. Для анализа отбирают 0,01 см³ полученного раствора. Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой пробы.

Количественное определение флокумафена (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Массовую концентрацию флокумафена в воздухе рабочей зоны C, (мг/м³) вычисляют по формуле:

а - содержание флокумафена в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

B - общий объем раствора пробы, см³;

б - хроматографируемый объем раствора пробы, см³;

V₂₀ - объем воздуха, отобранный для анализа (дм³) и приведенный к стандартным условиям (прилож. 1).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

C₁, C₂ - результаты параллельных определений массовой концентрации флокумафена в воздухе рабочей зоны, мг/м³;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м³;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация флокумафена менее 0,0025 мг/м³ (более 0,02 мг/м³)".

Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью показателя воспроизводимости по формуле:

C_ср1, C_ср2 - средние значения массовой концентрации флокумафена, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м³;

CD_0,95 - значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-02, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре 293 К (20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.):

V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, дм³;

P - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.