"МУК 4.1.2914-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточного содержания дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе хлебных злаков методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Дифлюфеникан - контактный персистентный гербицид из класса пиридинкарбоксамидов. Механизм действия связан с подавлением биосинтеза каротиноидов. Эффективен в борьбе с прорастающими широколистными и злаковыми сорными растениями, включая виды подмаренника, вероники и фиалки, в посевах озимой пшеницы, ячменя и люпина. Применяется до всходов или сразу же после появления всходов культурных растений.

Проходит регистрационные испытания в Российской Федерации в качестве гербицида в составе смесевых препаратов на посевах зерновых колосовых культур с нормой расхода до 180 г д.в./га.

Свидетельство о метрологической аттестации от 11.01.2011 N 01.00225/1-11.

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой концентрации дифлюфеникана в воде в диапазоне 0,0001 - 0,0010 мг/куб. дм, массовой доли дифлюфеникана в почве и зерне в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг, в соломе в диапазоне 0,05 - 0,50 мг/кг методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

Название вещества по ИСО: Дифлюфеникан.

Название вещества по ИЮПАК: 2',4'-дифтор-2-(альфа,альфа,альфа-трифтор-м-толилокси)никотинанилид.

Структурная формула (не приводится).

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Метод основан на экстракции дифлюфеникана из воды смесью гексан-этилацетат (1:1, по объему), из почвы, зерна и соломы водным ацетоном, очистке экстрактов, содержащих дифлюфеникан, от коэкстрактивных компонентов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, с последующим измерением содержания дифлюфеникана в очищенных экстрактах методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с электронозахватным детектором (ЭЗД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками, аналогичными приведенным в разделе 4.

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91, и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха (20 +/- 5) °C;

- атмосферное давление 84 - 106 кПа;

- относительная влажность воздуха не более 80%.

7.2. Условия хроматографического анализа

Температура термостата испарителя 270 °C;

Температура детектора 300 °C.

Режим программирования температуры колонки:

- начальная температура 150 °C;

- изотермический режим при 150 °C - 2 мин.;

- скорость подъема температуры:

в диапазоне от 150 до 260 °C - 25 °C/мин.;

в диапазоне от 260 до 270 °C - 5 °C/мин.;

- изотермический режим при 270 °C - 6 мин.;

- скорость подъема температуры:

в диапазоне от 270 до 280 °C - 10 °C/мин.;

- изотермический режим при 280 °C - 5 мин.

Расход газов:

- газа-носителя (азот) 2,4 куб. см/мин.;

- поддувочного газа через детектор 25 куб. см/мин.

Деление потока: 1:4.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Время удерживания дифлюфеникана: (10,2 +/- 0,2) мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,002 - 0,040 нг.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом. Срок хранения - 1 неделя.

Этилацетат промывают последовательно 5%-м водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют. Срок хранения - 1 неделя.

Капиллярную кварцевую колонку ZB-5 (типа SE-52) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °C и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 ч.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,0100 +/- 0,0001) г дифлюфеникана, растворяют в 40 куб. см этилацетата, доводят объем раствора этилацетатом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят при температуре не выше минус 18 °C в течение 3 месяцев.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного градуировочного раствора дифлюфеникана с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 8.3.1), разбавляют этилацетатом до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2 - 5.

Градуировочный раствор N 1 дифлюфеникана хранят при температуре не выше минус 18 °C в течение месяца.

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора N 1 дифлюфеникана с концентрацией 1,0 мкг/куб. см (п. 8.3.2), доводят объем раствора до метки смесью гексан-этилацетат (1:1, по объему), тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы N 2 - 5 с массовой концентрацией дифлюфеникана 0,002; 0,004; 0,01 и 0,02 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ x с) от массовой концентрации дифлюфеникана в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 градуировочным растворам (п. 8.3.3).

В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 8.3.3) и анализируют при условиях хроматографирования по п. 7.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", 17.4.3.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", 28168-89 "Почвы. Отбор проб", 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", Р 50436-92 "Зерновые. Отбор проб зерна", 27262-87 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб".

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре при температуре минус 18 °C не более 2 недель.

Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C не более 4 недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре минус 18 °C.

Пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности (в соответствии с ГОСТ 10852-86) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

9.1.1. Вода. В делительную воронку вместимостью 250 куб. см помещают 100 куб. см отфильтрованной воды, добавляют 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) и воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют указанной выше смесью еще дважды порциями по 20 куб. см. Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. и анализируют на содержание дифлюфеникана по п. 10.

9.1.2. Почва. Образец воздушно-сухой почвы массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Почву повторно экстрагируют 50 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему) в течение 30 мин. при встряхивании и фильтруют. Измеряют объем объединенного экстракта и 1/10 его часть, эквивалентную 2 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, куда приливают 25 куб. см дистиллированной воды. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.3. Зерно, солома. Образец размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 20 куб. см дистиллированной воды и спустя 10 мин. 80 куб. см ацетона. Суспензию перемешивают в течение 40 мин. на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/10 его часть, эквивалентную 1 г зерна или 0,5 г соломы, переносят в круглодонную колбу, куда приливают 25 куб. см дистиллированной воды. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

Отобранные аликвоты экстрактов почвы, зерна и соломы, полученные по пп. 9.1.2 и 9.1.3 и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (не менее 20 куб. см) при температуре не выше 40 °C. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему). Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Остаток экстракта почвы растворяют в 10 куб. см, экстракта зерна в 5 куб. см, экстракта соломы в 12,5 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и растворы анализируют на содержание дифлюфеникана по п. 10.

Полнота извлечения дифлюфеникана при проведении всех операций подготовки пробы не менее 89% для образцов почвы, зерна и соломы и не менее 95% для образцов воды.

10.1. В инжектор хроматографа вводят 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (пп. 9.1, 9.2), анализируют при условиях (п. 7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждого образца воды, почвы, зерна и соломы повторяют операции по пп. 9.1, 9.2, 10.1.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации дифлюфеникана в экстрактах, C, мкг/куб. см.

Массовую концентрацию дифлюфеникана X (мг/куб. дм) в образцах воды рассчитывают по формуле (2):

0,89 и 0,95 - коэффициент извлечения дифлюфеникана, учитывающий все процедуры подготовки пробы.

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (4):

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

11.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

+/- дельта - границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале:

"массовая концентрация дифлюфеникана в воде менее 0,0001 мг/куб. дм (более 0,0010 мг/куб. дм)";

"массовая доля дифлюфеникана в почве менее 0,01 мг/кг (более 0,10 мг/кг)";

"массовая доля дифлюфеникана в зерне менее 0,01 мг/кг (более 0,10 мг/кг)";

"массовая доля дифлюфеникана в соломе менее 0,05 мг/кг (более 0,50 мг/кг)".

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал дифлюфеникана, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,02 мкг/куб. см, разбавляют и анализируют в соответствии с данной методикой.

12.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 ("Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений"), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.