"МУК 4.1.2687-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания мезосульфурон-метила в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

3. Введены впервые.

Название вещества по ИСО: мезосульфурон-метил.

Название вещества по ИЮПАК: метил 2-[(4,6-диметоксипиримидин-2-илкарба-моил)-альфа-(метансульфонамидо)-р-толуат.

Структурная формула (не приводится).

Область применения

Мезосульфурон-метил - послевсходовый гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. Механизм его действия связан с подавлением синтеза аминокислот с разветвленной цепью (валин и изолейцин), приводящего к прекращению клеточного деления и роста. Он эффективно уничтожает злаковые (Echinochloa cruss-galli, Setaria spp., Elytrigia repens, Sorgum halepense) и широколистные сорные растения в посевах зерновых колосовых культур. Применяется в дозах до 15 г д.в./га.

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Метод основан на экстракции мезосульфурон-метила из воды хлористым метиленом, из почвы смесью ацетонитрила и бикарбоната натрия, из зеленой массы, зерна и соломы водным раствором ацетона, очистке экстрактов, содержащих мезосульфурон-метил, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей в щелочной и кислой средах, а также на колонке с силикагелем, с последующим измерением содержания мезосульфурон-метила в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 4.

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в следующих условиях:

- температура воздуха (20 +/- 5) °C;

- атмосферное давление (84 - 106) кПа;

- относительная влажность воздуха не более 80%.

7.2. Условия хроматографического анализа

Температура колонки: 27 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил - ортофосфорная кислота с молярной концентрацией 0,01 моль/куб. дм (1:1).

Скорость потока элюента: 0,5 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 233 нм.

Чувствительность: 0,001 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.

Время удерживания мезосульфурон-метила: 7,0 мин. +/- 0,2 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей, приготовление растворов и подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа, подготовка колонки с силикагелем.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед применением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

Приготовление раствора натрия углекислого кислого с массовой долей 5%. Навеску (5 +/- 0,1) г натрия углекислого кислого в конической колбе растворяют в 40 - 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора 1 неделя.

Растворитель промывают равным объемом раствора натрия углекислого кислого с массовой долей 5%, сушат над безводным хлоридом кальция и перегоняют над свежей порцией хлорида кальция.

Приготовление раствора гидроксида натрия с массовой долей 2%

Навеску 2 +/- 0,1 г гидроксида натрия в конической колбе растворяют в 40 - 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора 1 месяц.

Хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, раствором гидроксида натрия с массовой долей 2% и снова водой до нейтральной реакции промывных вод, после чего сушат над поташом и перегоняют.

Силикагель 60 (0,063 - 0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона, высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 5 - 6 часов и затем активируют при температуре 130 °C в течение 5 часов.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см вносят 137 куб. см 85,6%-ной ортофосфорной кислоты, добавляют 500 - 600 куб. см деионизованной воды, перемешивают и доводят объем раствора водой до метки.

Срок хранения - 1 месяц.

Отбирают 5 куб. см раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 2 моль/куб. дм, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, добавляют деионизованную воду и доводят объем раствора до метки, раствор перемешивают.

Срок хранения - 1 месяц.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, объем раствора доводят до метки водным раствором ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,01 моль/куб. дм (8.2), раствор перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.

Хроматографическую колонку Symmetry C18 устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °C и скорости потока приготовленной по 8.5 подвижной фазы 1 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии (дрейф базовой линии в течение 1 часа не более 5%, а уровень шумов не более 2% диапазона выходного сигнала на шкале измерений).

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 30 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания мезосульфурон-метила из колонки с силикагелем.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора мезосульфурон-метила с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле (8.9.2). Раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по 8.5. Промывают колонку 50 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Затем через колонку пропускают 100 куб. см смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему), отбирая последовательно по 10 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 2 куб. см подвижной фазы, подготовленной по 8.7, перемешивают, а затем хроматографируют. Условия хромтографирования - в соответствии с 7.2.

По результатам обнаружения мезосульфурон-метила в каждой из фракций определяют объем смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему), необходимый для полного вымывания мезосульфурон-метила из колонки.

Примечание: Профиль вымывания мезосульфурон-метила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г мезосульфурон-метила, растворяют в 40 - 50 куб. см ацетонитрила, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора мезосульфурон-метила с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см (8.9.1), раствор разбавляют ацетонитрилом и доводят объем до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2 - 5.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C в течение месяца.

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора мезосульфурон-метила с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (8.9.2), объем доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по 8.5, каждый раствор тщательно перемешивают, получают растворы N 2 - 5 с массовой концентрацией мезосульфурон-метила 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ x с) от массовой концентрации мезосульфурон-метила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4-м градуировочным растворам (8.9.3).

В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора (8.9.3) и анализируют при условиях 7.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", 26950-89 "Почвы. Отбор проб", Р 50436-92 "Зерновые. Отбор проб зерна".

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °C не более 2-х недель.

Образцы почвы подсушивают при комнатной температуре в течение 24 ч на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C не более 4-х недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре -18 °C.

Пробы зеленой массы замораживают и хранят при температуре -18 °C.

Пробы зерна и соломы высушивают до влажности (в соответствии с ГОСТ 10852-86) и хранят в холодильнике при температуре 4 °C.

Приготовление раствора гидроксида натрия с молярной концентрацией 1 моль/куб. дм. Навеску (4 +/- 0,1) г NaOH в конической колбе растворяют в 40 - 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора 1 месяц.

Водные экстракты, полученные по 9.1.2, 9.1.3 и 9.1.4, переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После расслоения органическую фазу отбрасывают, а водную фракцию еще дважды обрабатывают 15 и 10 куб. см хлористого метилена. Водную фракцию переносят в химический стакан, подкисляют раствором ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 2 моль/куб. дм до pH 3, контролируя кислотность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, приливают 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия в мерный цилиндр вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 15 и 10 куб. см хлористого метилена. Измеряют объем объединенной органической фазы и его часть, эквивалентную 2 г почвы и зерна, либо 1 г зеленой массы и соломы, переносят в круглодонную колбу вместимостью 25 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.3.

Сухой остаток в колбе, полученный по 9.2, растворяют в 3 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по 8.7. Колбу обмывают 2 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 45 куб. см смеси ацетон-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Мезосульфурон-метил элюируют с колонки 100 куб. см смеси ацетон-этилацетат (7:3, по объему), элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Сухой остаток экстрактов почвы и зерна растворяют в 1 куб. см, зеленой массы и соломы - в 2,5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по 8.5, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание мезосульфурон-метила по 10.

Полнота извлечения мезосульфурон-метила при проведении всех операций подготовки пробы не менее 79% для образцов почвы, зерна, зеленой массы и соломы и не менее 91% для образцов воды.

10.1. В инжектор хроматографа вводят 5 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (9.1.1 - 9.1.4), анализируют при условиях (7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждого образца воды, почвы, зеленой массы, зерна и соломы повторяют операции по 9.1 - 9.3, 10.1.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программное обеспечение "Breeze".

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации мезосульфурон-метила в экстрактах, C, мкг/куб. см.

Массовую концентрацию мезосульфурон-метила X, мг/куб. дм, в образцах воды рассчитывают по формуле (2):

Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

11.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал мезосульфурон-метила, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания мезосульфурон-метила учитывают разбавление.

12.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 ("Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений"), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 692-92-20.