"МУК 4.1.2913-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточного содержания флуопирама в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Флуопирам - новый фунгицид из класса пиридинилэтилбензамидов. Он эффективен в борьбе с возбудителями мучнистой росы, серой гнили, склерогиниоза и монилиального ожога на виноградниках, посадках семечковых и косточковых плодовых, овощных и полевых культурах. Механизм его действия связан с ингибированием комплекса II в электронтранспортной цепи митохондрий.

Проходит регистрационные испытания в Российской Федерации в качестве фунгицида в составе смесевых препаратов с триазолами на посевах зерновых колосовых злаков с нормой расхода до 15 г д.в./га.

Свидетельство о метрологической аттестации от 27.01.2011 N 01.00225/5-11.

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой концентрации флуопирама в воде в диапазоне 0,001 - 0,010 мг/куб. дм, массовой доли в почве и зерне в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг, в соломе в диапазоне 0,05 - 0,50 мг/кг методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

Название вещества по ИСО: флуопирам.

Название вещества по ИЮПАК: N-{2-[3-хлор-5-(трифторметил)пиридин-2-ил]этил}-2-(трифторметил)бензамид.

Структурная формула (не приводится).

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Метод основан на экстракции флуопирама из воды гексаном, из почвы, зерна и соломы водным ацетоном, очистке экстрактов, содержащих флуопирам, от коэкстрактивных компонентов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с флоризмом, разделением компонентов очищенных экстрактов методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с последующим измерением содержания флуопирама с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной калибровки.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками, аналогичными приведенным в разделе 4.

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91, и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.51313-03 и 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

Температура воздуха (20 +/- 5) °С.

Атмосферное давление 84 - 106 кПа.

Относительная влажность воздуха не более 80%.

Температура термостата испарителя 260 °С;

Температура термостата детектора 280 °С.

Режим программирования температуры колонки:

- начальная температура 160 °С;

- изотермический режим при 160 °С - 2 мин.;

- скорость подъема температуры:

в диапазоне от 160 до 235 °С - 25 °С/мин.;

в диапазоне от 235 до 250 °С - 3 °С/мин.;

- изотермический режим при 250 °С - 5 мин.;

- скорость подъема температуры

в диапазоне от 250 до 270 °С - 20 °С/мин.;

- изотермический режим при 270 °С - 5 мин.

Расход газов:

- газа-носителя (азот) 2,5 куб. см/мин.;

- поддувочного газа через детектор 25 куб. см/мин.

Деление потока: 1:3.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Время удерживания флуопирама: (8,1 +/- 0,2) мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,01 - 0,10 нг.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с флоризилом.

8.1.1. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом. Срок хранения - 1 неделя.

8.1.2. Очистка этилацетата

Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%

Навеску (5 +/- 0,1) г натрия углекислого в конической колбе растворяют в 40 - 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора - 1 неделя.

Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют. Срок хранения - 1 неделя.

8.1.3. Очистка ацетона

Капиллярную кварцевую колонку ZB-5 (типа SE-52) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °С и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 ч.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г флоризила в 20 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания флуопирама из колонки с флоризилом.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора флуопирама с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см в этилацетате (п. 8.5.2). Раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.3. Промывают колонку 50 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Затем через колонку пропускают 50 куб. см смеси гексан-этилацетат (6:4, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, сухие остатки растворяют в 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и затем хроматографируют в соответствии с п. 7.2.

По результатам обнаружения флуопирама в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-этилацетат (6:4, по объему), необходимый для полного вымывания флуопирама из колонки.

8.5.1. Исходный раствор флуопирама для градуировки с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г флуопирама, растворяют в 40 - 50 куб. см этилацетата, доводят объем раствора до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.

Раствор хранят при температуре не выше минус 18 °С не более 2 месяцев.

8.5.2. Градуировочный раствор флуопирама с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (раствор N 1)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора флуопирама с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 8.5.1), разбавляют смесью гексан-этилацетат (8:2, по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.

Градуировочный раствор N 1 хранят при температуре не выше минус 18 °С в течение месяца.

8.5.3. Градуировочные растворы флуопирама с массовой концентрацией (0,01 - 0,10) мкг/куб. см (растворы N 2 - 5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 куб. см градуировочного раствора N 1 флуопирама с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 8.5.2), доводят до метки смесью гексан-этилацетат (8:2, по объему), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией флуопирама 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/куб. см соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х с) от концентрации флуопирама в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 градуировочным растворам.

В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 8.5.3) и анализируют при условиях п. 7.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", 17.4.3.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", 28168-89 "Почвы. Отбор проб", 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", Р 50436-92 "Зерновые. Отбор проб зерна", 27262-87 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб".

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре минус 18 °С не более 2 недель.

Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более 4 недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре минус 18 °С.

Пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности (в соответствии с ГОСТ 10852-86) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

9.1.1. Вода. 100 куб. см отфильтрованной воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 30 куб. см смеси гексана и воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют гексаном еще дважды порциями 30 и 20 куб. см. Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание флуопирама по п. 10.

9.1.2. Почва. Образец воздушно-сухой почвы массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Почву повторно экстрагируют 50 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему) в течение 30 мин. при встряхивании и фильтруют. Измеряют объем объединенного экстракта и 1/4 его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, куда приливают 25 куб. см дистиллированной воды. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.3. Зерно, солома. Образец размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 20 куб. см дистиллированной воды и спустя 10 мин. 80 куб. см ацетона. Суспензию перемешивают в течение 40 мин. на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/2 часть экстракта зерна, эквивалентную 5 г образца, или 1/5 часть экстракта соломы, эквивалентную 1 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, куда приливают 25 куб. см дистиллированной воды. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

Отобранные аликвоты экстрактов почвы, зерна и соломы, полученные по п. п. 9.1.2 и 9.1.3 и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (не менее 20 куб. см) при температуре не выше 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. Колбу ополаскивают 10 куб. см дистиллированной воды, которую также переносят в делительную воронку. К водному раствору приливают 30 куб. см гексана и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 куб. см гексана. Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.3.

Сухой остаток экстрактов почвы, зерна и соломы, полученный по п. 9.2, растворяют в 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 2 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.3. Колбу обмывают 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 40 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Флуопирам элюируют с колонки 45 куб. см смеси гексан-этилацетат (6:4, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток экстрактов почвы, зерна и соломы растворяют в 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 2 мин., и анализируют на содержание флуопирама по п. 10.

Полнота извлечения флуопирама при проведении всех операций подготовки пробы не менее 88% для образцов почвы, зерна и соломы и не менее 93% для образцов воды.

10.1. В инжектор хроматографа вводят 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (п. п. 9.1 - 9.3), анализируют при условиях п. 7.2 и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждого образца воды, почвы, зерна и соломы повторяют операции по п. п. 9.1 - 9.3, 10.1.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации флуопирама в экстрактах, C, мкг/куб. см.

Массовую концентрацию флуопирама X (мг/куб. дм) в образцах воды рассчитывают по формуле (2):

Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

11.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

В случае если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале:

"массовая концентрация флуопирама в воде менее 0,001 мг/куб. дм (более 0,010 мг/куб. дм)";

"массовая доля флуопирама в почве и зерне менее 0,01 мг/кг (более 0,10 мг/кг)";

"массовая доля флуопирама в соломе менее 0,05 мг/кг (более 0,50 мг/кг)".

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал флуопирама, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,1 мкг/куб. см, разбавляют и анализируют в соответствии с данной методикой.

12.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 ("Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений"), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.