"ГОСТ 30627.4-98. Межгосударственный стандарт. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина PP (ниацина)"
(введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.04.1999 N 145)

1. Разработан МТК 186 Научно-исследовательским институтом детского питания.

Внесен Госстандартом России.

2. Принят Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 12 ноября 1998 г. N 14).

За принятие проголосовали:

3. Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. N 145 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.4-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.

4. Введен впервые.

Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина PP (ниацина).

Метод основан на реакции, протекающей в две стадии: 1-я - взаимодействие пиридинового кольца никотиновой кислоты с бромистым роданом, 2-я - образование окрашенного производного глутаконового альдегида. Интенсивность окраски образующегося соединения прямо пропорциональна массовой доле витамина PP, измеряется колориметрически.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 4109-79 Бром. Технические условия

ГОСТ 4139-75 Калий роданистый. Технические условия

ГОСТ 4174-77 Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4530-76 Кальций углекислый. Технические условия

ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов

ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов

ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

ГОСТ 6016-77 Спирт изобутиловый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25664-83 Метол (4-метиламинофенол сульфат). Технические условия

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу

ГОСТ 27067-79 Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования

ГОСТ 29251-91 Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть I. Общие требования.

Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.

Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °C с погрешностью +/- 2 °C.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Бюретка исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 25 см3 по ГОСТ 29251.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.

Воронка Бюхнера для горячего фильтрования.

Воронки стеклянные лабораторные типа В по ГОСТ 25336.

Капельница стеклянная лабораторная по ГОСТ 25336.

Колбы для фильтрования под вакуумом (колба Бунзена) вместимостью 2000 см3.

Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 50, 100, 250, 1000 см3 по ГОСТ 1770.

Колбы типа Кн исполнения 2 номинальной вместимостью 250, 1000 см3 по ГОСТ 25336.

Насос стеклянный водоструйный лабораторный.

Пипетки исполнений 4, 5 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2, 5, 10 см3 по ГОСТ 29227.

Пипетки исполнений 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 25 см3 по ГОСТ 29227.

Пробирки стеклянные исполнений П1 и П2 номинальной вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336.

Секундомер 2-го класса [1].

Стакан фарфоровый номинальной вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 9147.

Термометр жидкостный (нертутный) диапазоном измерения от 0 до 100 °C, ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.

Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения от 220 до 1100 нм [2] или колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения от 200 до 2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания от 100 до 1% [3].

Цилиндры исполнения 1 вместимостью 50, 100, 250, 500 см3 по ГОСТ 1770.

Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.

Шкаф вытяжной.

Активированный уголь.

Аммоний роданистый ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 27067.

Бром ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4109.

Витамин PP (никотиновая кислота) [4].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Калий роданистый ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4139.

Кальций углекислый ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4530.

Кислота серная ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4204.

Кислота соляная ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 3118.

Метол х.ч. по ГОСТ 25664.

Натрия гидроокись ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4328.

Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Фенолфталеин [5].

Цинк сернокислый ч. по ГОСТ 4174.

Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

Хранение растворов по ГОСТ 4212.

Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.

5.1. Приготовление водного раствора серной кислоты молярной концентрации 

139 см3 концентрированной серной кислоты плотностью 1,84 г/см3 осторожно приливают к 300 см3 дистиллированной воды в фарфоровом стакане, перемешивают, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят дистиллированной водой до метки и вновь перемешивают.

5.2. Приготовление основного стандартного раствора никотиновой кислоты массовой концентрации 100 мкг/см3

Взвешивают (0,050 +/- 0,004) г никотиновой кислоты на весах 2-го класса точности, растворяют в 300 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 500 см3, приливают 5 см3 раствора серной кислоты молярной концентрации . После растворения доводят объем до метки дистиллированной водой и добавляют 0,5 см3 толуола.

Раствор хранят при (6 +/- 2) °C не более 3 мес.

5.1. Приготовление рабочего стандартного раствора никотиновой кислоты массовой концентрации 2 мкг/см3

2 см3 основного стандартного раствора никотиновой кислоты растворяют в 30 - 50 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.4. Приготовление раствора бромной воды

В темную склянку с притертой пробкой наливают 100 см3 дистиллированной воды, добавляют в вытяжном шкафу 4 см3 брома, хорошо встряхивают и выдерживают в защищенном от света месте 3 - 5 сут для лучшего насыщения.

5.5. Приготовление раствора роданистого калия или роданистого аммония массовой концентрации 0,1 г/см3

Взвешивают (10,00 +/- 0,04) г роданистого калия или роданистого аммония на весах 4-го класса точности, растворяют в 50 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.6. Приготовление роданбромидного раствора

К 20 см3 охлажденной на льду бромной воде прибавляют по каплям охлажденный раствор роданистого калия или роданистого аммония массовой концентрации 0,1 г/см3 до полного обесцвечивания бромной воды. К обесцвеченному раствору постепенно добавляют небольшими порциями 0,10 - 0,15 г углекислого кальция, взвешенного на весах 4-го класса точности, до прекращения выделения пузырьков газа и образования осадка углекислого кальция.

Раствор фильтруют в склянку из темного стекла с притертой пробкой и до использования оставляют во льду.

Готовят роданбромидный раствор только в вытяжном шкафу и непосредственно перед применением.

5.7. Приготовление водного раствора серной кислоты молярной концентрации 

2,8 см3 концентрированной серной кислоты плотностью 1,84 г/см3 растворяют в 300 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3, охлаждают, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.8. Перекристаллизация метола

Отмеривают 500 см3 раствора серной кислоты молярной концентрации в коническую колбу вместимостью 1000 см3 и нагревают до кипения. В кипящий раствор добавляют (100 +/- 0,4) г метола, взвешенного на весах 4-го класса точности, и вновь доводят до кипения. Если раствор сильно окрашен, к нему добавляют (10 +/- 0,1) г активированного угля, взвешенного на весах 4-го класса точности. Затем раствор немедленно фильтруют через воронку Бюхнера в колбу Бунзена, предварительно нагретые в сушильном шкафу при (80 +/- 5) °C. Фильтрат переносят в химический стакан вместимостью 1000 см3, добавляют 700 см3 этилового спирта, размешивают стеклянной палочкой и выдерживают в холодильнике 14 - 16 ч. После этого фильтруют через воронку Бюхнера. Кристаллы на фильтре промывают трижды порциями 30 - 40 см3 охлажденного до (6 +/- 2) °C этилового спирта и высушивают на воздухе в темном месте.

Перекристаллизованный метол хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой и в защищенном от света месте.

5.9. Приготовление раствора метола массовой концентрации 0,08 г/см3

(8,00 +/- 0,04) г метола, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 30 - 50 см3 раствора соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 0,5 моль/дм3 в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят объем до метки тем же раствором и перемешивают. Раствор готовят перед применением.

5.10. Приготовление раствора серной кислоты молярной концентрации 

56 см3 концентрированной серной кислоты плотностью 1,84 г/см3 растворяют в 300 - 500 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3, охлаждают, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.11. Приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/см3

(1,00 +/- 0,04) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 см3 этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, добавляют 30 см3 дистиллированной воды и перемешивают.

5.12. Приготовление водного раствора сернокислого цинка массовой концентрации 0,8 г/см3

(80,00 +/- 0,04) г сернокислого цинка, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.13. Приготовление водного раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 10 моль/дм3

(400,0 +/- 0,4) г гидроокиси натрия, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют при перемешивании в 500 - 700 см3 дистиллированной воды в фарфоровом стакане, раствор охлаждают до (20 +/- 5) °C, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.14. Приготовление водного раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 4 моль/дм3

Взвешивают (160,0 +/- 0,4) г гидроокиси натрия на весах 4-го класса точности и растворяют при перемешивании в 500 - 700 см3 дистиллированной воды в фарфоровом стакане. Раствор охлаждают до (20 +/- 5) °C, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.15. Кислотный гидролиз

Взвешивают (6,00 +/- 0,04) г продукта на весах 4-го класса точности, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и приливают 75 см3 раствора серной кислоты молярной концентрации , смывая воронку и горлышко колбы этим же раствором. Колбу помещают в водяную баню температурой (90 +/- 5) °C на (90 +/- 1) мин. По истечении времени колбы охлаждают, доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр.

5.16. Очистка фильтрата

25 см3 полученного фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, пипеткой добавляют две капли спиртового раствора фенолфталеина и приливают раствор гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 10 моль/дм3 до получения бледно-розового окрашивания. Избыток щелочи нейтрализуют раствором серной кислоты молярной концентрации до обесцвечивания.

Затем раствор охлаждают до (20 +/- 5) °C, добавляют 2 см3 раствора сернокислого цинка массовой концентрации 0,8 г/см3 и для устранения пены 1 - 2 капли этилового или изобутилового спирта. Перемешивая содержимое колбы, добавляют по каплям раствор гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 4 моль/дм3 до образования густого осадка гидроокиси цинка и появления бледно-розового окрашивания. Избыток щелочи устраняют, добавляя по каплям раствор серной кислоты молярной концентрации до исчезновения бледно-розового окрашивания.

Оставляют смесь на (10 +/- 1) мин, периодически перемешивая. Затем доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр.

При необходимости на этом этапе анализ можно прервать на 3 - 5 сут, сохраняя фильтрат при (6 +/- 2) °C.

5.17. Цветная реакция

Для проведения цветной реакции используют восемь пробирок. В четыре пробирки наливают по 5 см3 полученного фильтрата, в три следующие - по 5 см3 рабочего стандартного раствора никотиновой кислоты и в восьмую пробирку - 5 см3 дистиллированной воды (холостая проба).

Все пробирки помещают в водяную баню температурой (50 +/- 2) °C на 5 мин. Затем в две пробирки с фильтратом (условно обозначенные "опыт") и во все пробирки со стандартным раствором, а также в пробирку с дистиллированной водой из бюретки в вытяжном шкафу добавляют по 2 см3 роданбромидного раствора. Закрывают пробирки и перемешивают встряхиванием.

В две другие пробирки с фильтратом добавляют по 2 см3 дистиллированной воды (контроль на присутствие окрашенных и способных реагировать с метолом веществ). Все пробирки оставляют в водяной бане еще на 10 мин. По истечении времени все пробирки охлаждают водой до (20 +/- 5) °C, помещают на 10 мин в темное место и затем в каждую из них добавляют по 3 см3 раствора метола, перемешивают встряхиванием и оставляют на 60 мин в темном месте.

Содержимое всех пробирок фильтруют и измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 425 нм.

Массовую долю витамина PP (ниацина) X, , вычисляют по формуле

где A - среднее арифметическое значение показаний оптической плотности исследуемого раствора;

- среднее арифметическое значение показаний оптической плотности контроля на окрашенные вещества;

m - масса никотиновой кислоты в 5 см3 стандартного раствора, мкг;

V - объем фильтрата после гидролиза, см3;

- объем раствора после обработки сернокислым цинком, см3;

- среднее арифметическое значение показаний оптической плотности стандартного раствора никотиновой кислоты;

- показание оптической плотности холостой пробы;

- объем гидролизата, взятый на обработку сернокислым цинком, см3;

- объем раствора, взятый для проведения цветной реакции, см3;

- масса продукта, взятая для анализа, г.

За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.

Относительная погрешность измерения массовой доли витамина PP - +/- 30% при доверительной вероятности P = 0,95.

Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 30% среднего арифметического значения результатов измерений.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 30% по отношению к среднему арифметическому значению результатов измерений.