"ФС.2.1.0367. Фармакопейная статья. Флударабина фосфат. Флударабин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

9-(5-O-Фосфоно--D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин.

Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% флударабина фосфата C₁₀H₁₃FN₅O₇P в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

<*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в воде, практически нерастворим в этаноле.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата.

2. ВЭЖХ. Время удерживания пика основного вещества на хроматограмме испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А) (раздел "Количественное определение").

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +10,0 до +14,0 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (ОФС "Оптическое вращение").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, прибавляют 15 мл воды, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки.

Прозрачность раствора. Раствор должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Испытуемый раствор. Растворяют 50 мг субстанции в 5 мл диметилформамида, при необходимости обрабатывая ультразвуком.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен выдерживать сравнение с эталоном BY₅ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

pH раствора. От 2,0 до 4,0 (0,1% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография"). Все растворы используют сразу после приготовления.

- сумма неидентифицированных примесей - не более 0,5%;

- сумма всех примесей, определенных в тестах 1 и 2 - не более 2,0%.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол - калия дигидрофосфата раствор 0,01 М 60:940.

Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора ПФ до метки.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор стандартного образца флударабина фосфата (А). Помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б). В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца флударабина фосфата (А) и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М, нагревают на водяной бане при температуре 80 °C в течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б) и доводят объем раствора ПФ до метки.

Примечание

Примесь A: 6-амино-9-(5-O-фосфоно--арабинофуранозил)-1,9-дигидро-2H-пурин-2-он [62314-92-5].

Примесь B: 6-амино-1,7-дигидро-2H-пурин-2-он [3373-53-3].

Примесь C: 9-(3,5-ди-O-фосфоно--D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин [548774-53-4].

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина фосфата (А), раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б) и испытуемый раствор А.

Относительное время удерживания соединений. Флударабина фосфат - 1 (около 9 мин); примесь A - около 0,26; примесь B - около 0,34; примесь C - около 0,42.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси C используется хроматограмма раствора стандартного образца флударабина фосфата (А). В случае возникновения затруднений при идентификации пиков примесей A и B хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы при длине волны 292 нм.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_s) между пиками примеси A и примеси B должно быть не менее 2,0 (при длине волны 292 нм).

На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):

- фактор асимметрии пика (A_s) флударабина фосфата должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0% (6 определений).

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь A - 4,0; примесь B - около 2,5; примесь C - 1,9.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;

S₀ - площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б);

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;

a₁ - навеска субстанции, мг;

P - содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.

- примесь A - не более 0,8%;

- примесь C - не более 0,4%;

- примесь B - не более 0,2%;

- любой другой примеси - не более 0,1%.

Не учитывают пики, элюирующиеся после пика флударабина фосфата, и пики менее 0,05%.

2. Примеси, элюирующиеся после основного пика. Определение проводят в условиях испытания "Родственные примеси. Примеси, элюирующиеся до основного пика" со следующими изменениями.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол - калия дигидрофосфата раствор 0,01 М 200:800.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца флударабина для пригодности системы, содержащего примеси D, E и F, прибавляют 7 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора ПФ до метки.

Примечание

Примесь D: 2-фтор-7H-пурин-6-амин [700-49-2].

Примесь E: 9-(-D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин [21679-14-1].

Примесь F: 9-(5-O-фосфоно--D-арабинофуранозил)-2-этокси-9H-пурин-6-амин [159002-28-5].

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б) и испытуемый раствор А.

Относительное время удерживания соединений. Флударабина фосфат - 1 (около 2,5 мин); примесь D - около 1,5; примесь E - около 1,9; примесь F - около 2,5.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_s) между пиками флударабина фосфата и примеси D должно быть не менее 5,0.

На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):

- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 5,0% (6 введений);

- фактор асимметрии пика (A_s) флударабина фосфата должен быть не более 2,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь D - 0,5; примесь E - около 0,6; примесь F - 1,8.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;

S₀ - площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б);

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;

a₁ - навеска субстанции, мг;

P - содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.

- примесь E - не более 0,2%;

- примесь F - не более 0,2%;

- примесь D - не более 0,15%;

- любой другой примеси - не более 0,1%.

Не учитывают пики, элюирующиеся до пика флударабина фосфата, и пики менее 0,05%.

Вода. Не более 3,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) тонкоизмельченной субстанции. Перед титрованием субстанцию взбалтывают с 30 мл метанола безводного в течение 30 с.

Натрий. Не более 0,2%. Определение проводят методом атомно-эмиссионной спектрометрии с пламенной атомизацией (ОФС "Атомно-эмиссионная спектрометрия").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,5084 г натрия хлорида, предварительно высушенного при 105 °C до постоянной массы, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Контрольный раствор. Вода.

Определяют атомную эмиссию стандартного и испытуемого растворов на линии спектра излучения натрия при длине волны 589,0 нм.

Отклик эмиссии испытуемого раствора не должен превышать отклик эмиссии стандартного раствора.

Фосфаты. Не более 0,1% (ОФС "Фосфаты"). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Хлориды. Не более 0,2% (ОФС "Хлориды"). Растворяют 10 мг субстанции в 10 мл воды.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б), в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 4,0 ЕЭ на 1 мг флударабина фосфата (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

--------------------------------

<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси. Примеси, элюирующиеся до основного пика" со следующими изменениями.

Хроматографируют раствор стандартного образца флударабина фосфата (А) и испытуемый раствор Б.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А):

- фактор асимметрии пика (A_s) флударабина фосфата должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0% (6 введений);

- относительное стандартное отклонение времени удерживания пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0% (6 введений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику флударабина фосфата, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание флударабина фосфата C₁₀H₁₃FN₅O₇P в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме испытуемого раствора Б;

S₀ - площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А);

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;

a₁ - навеска субстанции, мг;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

P - содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищенном от света месте, при температуре от +2 до +8 °C.