"МУК 4.1.3075-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств боскалида в томатах (плоды, сок), огурцах, моркови, картофеле и капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.07.2013)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. N 1).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 июля 2013 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации от 24.08.2012 N 0130.24.08.12.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств боскалида в томатах, томатном соке, огурцах, моркови, картофеле и капусте в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: боскалид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-хлор-N-(4-хлор-бифенил-2-ил)никотинамид.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: 

Молекулярная масса: 343,2.

Боскалид представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха. Давление паров - (при 25 °C). Плотность 1,38 (при 20 °C). Температура плавления 142,8 - 143,8 °C. Растворимость в воде - 4,64 г/куб. дм (при 20 °C, pH 6,0). Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 25 °C): ацетон - 160 - 200, ацетонитрил - 40 - 50, метанол - 40 - 50, дихлорметан - 200 - 250. Коэффициент распределения н-октанол/вода (при pH 7,0 - 7,2). Гидролитически стабилен при отсутствии света при температуре 50 °C (pH 4, 7 и 9) в течение 5 дней, при температуре 25 °C (pH 5, 7 и 9) - в течение 30 дней.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность () для крыс > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность () для крыс > 2000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность () для крыс > 6,7 мг/куб. дм (4 ч).

Область применения

Боскалид - высокоэффективный контактный фунгицид длительного действия, применяемый для борьбы против различных возбудителей болезней.

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

Методика основана на определении боскалида с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД) после экстракции из анализируемых проб смесью ацетон-вода, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/кв. см), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на газовом хроматографе и подтвердившего соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем, проверка хроматографического поведения боскалида на колонке.

7.1.1. Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над безводным карбонатом калия.

7.1.2. Дихлорметан и этилацетат

7.1.2.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 куб. см, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.2.2. Очистка растворителей. Каждый растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.3. Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.4. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством и безводным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2.1. Исходный раствор боскалида для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г боскалида, растворяют в 50 - 60 куб. см этилацетата, доводят этилацетатом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение месяца.

7.2.2. Раствор N 1 боскалида для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора боскалида с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.2.1), разбавляют этилацетатом до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение месяца.

7.2.3. Рабочие растворы N 2 - 5 боскалида для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.2.2), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрациями боскалида 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 14 дней.

7.2.4. Рабочий раствор N 6 боскалида для внесения (концентрация 1,0 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора боскалида с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.2.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 6 с концентрацией боскалида 1,0 мкг/куб. см.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 14 дней.

Раствор N 6 используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества из проб методом "внесено-найдено".

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика (мВ х c) от концентрации боскалида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков (мВ х c) боскалида.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г силикагеля в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия массой 1 г. Колонка готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см раствора N 1 для градуировки с концентрацией боскалида 10 мкг/куб. см (п. 7.2.2), добавляют 0,5 куб. см этилацетата, затем 5 куб. см гексана, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.4. Колбу обмывают дважды гексаном по 2,5 куб. см, который также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 20 куб. см гексана, 20 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), элюаты отбрасывают.

Затем колонку промывают 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см этилацетата, анализируют по п. 9.4.

Фракции, содержащие боскалид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения боскалида следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями: томаты - ГОСТ 1725-85 "Томаты свежие. Технические условия"; ГОСТ Р 51810-01 "Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети. Технические условия"; сок - ГОСТ 26313-84 "Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб"; огурцы - ГОСТ 1726-85 "Огурцы свежие. Технические условия"; морковь - ГОСТ Р 51782-01 "Морковь столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия", ГОСТ 28275-94 "Морковь столовая свежая. Руководство по хранению", ГОСТ 1721-85 "Морковь столовая свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия"; картофель - ГОСТ Р 51808-01 "Картофель свежий продовольственный, реализуемый в розничной торговой сети. Технические условия", ГОСТ 7194-81 "Картофель свежий. Правила приемки и методы определения качества", ГОСТ 7176-85 "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. Технические условия"; капуста - ГОСТ Р 51809-01 "Капуста белокочанная свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия", ГОСТ 1724-85 "Капуста белокочанная свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия" и Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (от 21.08.79 N 2051-79).

Отобранные пробы томатов, огурцов, картофеля и капусты хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C.

Пробы томатного сока анализируют в день изготовления.

Перед анализом образцы измельчают на гомогенизаторе.

9.1.1. Томаты, огурцы, морковь, картофель, капуста

Образец массой 20 г помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 100 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему), гомогенизируют в течение 3 мин., затем помещают на встряхиватель на 30 мин. Полученный экстракт (надосадочная жидкость) осторожно декантируют, фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр средней плотности под вакуумом. Осадок на фильтре возвращают в колбу и повторяют экстракцию дополнительной порцией смеси ацетон-вода (8:2, по объему) объемом 60 куб. см, выдерживая на встряхивателе 5 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр средней плотности, осадок на фильтре промывают 20 куб. см этой же смеси, объединенный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 куб. см.

Доводят общий объем раствора в цилиндре до 200 куб. см смесью ацетон-вода (8:2, по объему), перемешивают. Аликвоту раствора объемом 100 куб. см (соответствующую 10 г анализируемого образца) переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см, добавляют 10 куб. см дистиллированной воды, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C до водного остатка (около 20 куб. см) и подвергают очистке по п. 9.2.

9.1.2. Томатный сок

К образцу сока массой 20 г в конической колбе (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 куб. см добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему), интенсивно встряхивают в течение 5 мин., помещают в холодильник (4 °C) на 1 ч. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр средней плотности под вакуумом, дважды промывая остаток на фильтре 20 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему). Полученный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 куб. см.

Доводят общий объем раствора в цилиндре до 200 куб. см смесью ацетон-вода (8:2, по объему), перемешивают. Аликвоту раствора объемом 100 куб. см (соответствующую 10 г анализируемого образца) переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см, добавляют 10 куб. см дистиллированной воды, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C до водного остатка (около 20 куб. см) и подвергают очистке по п. 9.2.

Водный остаток, полученный по пп. 9.1.1 или 9.1.2, переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Колбу ополаскивают 30 куб. см ацетонитрила, который также переносят в делительную воронку. Вносят в воронку 30 куб. см гексана, 10 куб. см 5%-го водного раствора хлористого натрия, интенсивно встряхивают в течение 5 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют и отбрасывают. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и операцию промывки встряхиванием ее в течение 5 мин. с гексаном порциями по 30 куб. см повторяют еще дважды. Верхние гексановые слои отбрасывают. Нижнюю водную фазу вновь возвращают в делительную воронку, вносят 30 куб. см дихлорметана, интенсивно встряхивают 5 мин. После разделения фаз, нижний органический слой отделяют, фильтруя через безводный сульфат натрия (5 г), помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см. Операцию экстракции повторяют новой порцией дихлорметана объемом 30 куб. см, встряхивая в течение 5 мин. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

Остаток, полученный по п. 9.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 0,5 куб. см этилацетата, помещая на ультразвуковую баню на 1 мин., добавляют 5 куб. см гексана, перемешивают. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают дважды гексаном порциями по 2,5 куб. см, которые также наносят на колонку, скорость прохождения растворителей через колонку 1 - 2 капли в секунду. Промывают колонку последовательно 20 куб. см гексана, 20 куб. см смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), элюаты отбрасывают.

Боскалид элюируют с колонки 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 4 куб. см этилацетата и анализируют на содержание боскалида в условиях хроматографирования по п. 9.4.

Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором, с пределом детектирования по линдану .

Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, содержащая сорбент: 35% фенил- и 86% диметилполисилоксана (толщина пленки сорбента 0,5 мкм).

Температура:

- детектора 310 °C;

- испарителя 270 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 200 °C, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 280 °C, выдержка 23 мин.

Газ 1 (азот): давление 81 кПа, скорость 41,5 см/с, поток 1,5 куб. см/мин.

Газ 2: деление потока 1:5; сброс 7,5 куб. см/мин.

Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор боскалида с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом (не более чем в 50 раз).

Содержание боскалида в пробе томатов, томатного сока, огурцов, моркови, картофеля, капусты (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где X - содержание боскалида в пробе томатов, томатного сока, огурцов, моркови, картофеля, капусты, мг/кг;

A - концентрация боскалида, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г;

K - коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятый для анализа (равен 2).

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

где - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание боскалида в пробе томатов, томатного сока, огурцов, моркови, картофеля, капусты менее 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения боскалида в томатах, томатном соке, огурцах, моркови, картофеле, капусте.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание боскалида в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/куб. см.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где X - концентрация боскалида в пробе при контрольном измерении, мкг/куб. см;

C - известная концентрация градуировочного раствора боскалида, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/куб. см;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов боскалида, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом "добавок".

Величина добавки должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

где - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры рассчитывают по формуле:

где - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры () с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предел воспроизводимости (R):

где - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.