"МУК 4.1.2169-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Метамитрона в ботве и корнеплодах столовой и кормовой свеклы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 15.02.2007)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в ботве и корнеплодах столовой и кормовой свеклы массовой концентрации Метамитрона в диапазоне 0,03 - 0,5 мг/кг.

Метамитрон - действующее вещество препарата Голтикс; СП, 700 г/кг, фирма-производитель: Мактешим Аган (Израиль).

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-амино-3-метил-6-фенил-1,2,4-триазин-5-он.

Структурная формула (не приводится).

Не раздражает кожу и слизистую оболочку глаз.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0,025 мг/кг/сут.;

МДУ в сахарной и столовой свекле - 0,03 мг/кг.

Область применения:

Метамитрон - избирательный системный гербицид, ингибирует фотосинтез. В растения проникает через корни, но может проступать и через листья. Препарат на основе Метамитрона фирмы Мактешим Аган - Голтикс; СП, 700 г/кг - применяется для борьбы с однолетними двудольными сорняками при возделывании сахарной, столовой и кормовой свеклы при нормах расхода 1,5 - 2 кг/га путем опрыскивания почвы до посева (с заделкой), до всходов или в фазу 1 - 2-х настоящих листьев культуры.

Рекомендовано совместное использование с другими гербицидами, применяемыми в посевах свеклы, в том числе с метолахлором и фенмедифамом.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблицах 1 и 1а для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблицах 2 и 2а.

Метод основан на извлечении Метамитрона из ботвы и корнеплодов столовой и кормовой свеклы ацетонитрилом, переэкстракции в хлористый метилен, очистке полученного экстракта от мешающих анализу веществ на колонке, заполненной Флоризилом, и окончательном определении Метамитрона методом ГЖХ с использованием термоионного детектора.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается использованием избирательного термоионного детектора и капиллярной колонки с программированием температуры.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е.

Весы лабораторные технические ВЛТК-500, ГОСТ 7328.

Колбы мерные вместимостью 10, 50 и 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микрошприцы вместимостью 10 куб. мм, Гамильтон.

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см, ГОСТ 20292-74.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Аналитический стандарт Метамитрона с содержанием 99,5% д.в., ГСО 7659-99.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-06-1092-83.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Гелий очищенный марки "А", ТУ-51-940-80.

Метилен хлористый, ч., ГОСТ 19433-88.

Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 - 80 меш, фирма Мерк.

Стандартный раствор Метамитрона в ацетоне - 1 мг/куб. см (хранить в холодильнике, срок годности 120 сут.).

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.

Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.

Вакуумный ротационный испаритель МР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В 461.

Колбы грушевидные (концентраторы), ГОСТ 10394-72.

Концентраторы грушевидные (конические) 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая DB-1701 (14% цианопропилфенилмиликона + 86% метилсиликона), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма J&W Scientific.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Фильтры бумажные "красная лента", ТУ 6-09-2678-77.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

На дно пластиковой хроматографической колонки (высота 15 см, диаметр 1,5 см) помещают пробку из стекловаты и заполняют колонку Флоризилом на высоту 5 см. На слой Флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. За день до очистки экстракта колонку промывают последовательно 20 куб. см ацетона и 10 куб. см гексана, смывы отбрасывают. После промывки колонка готова к работе.

При отработке методики или поступлении новой партии Флоризила проводят изучение поведения Метамитрона на колонке. В концентратор вносят 2 куб. см стандартного раствора Метамитрона с концентрацией 3 мкг/куб. см, добавляют 8 мл гексана, перемешивают содержимое концентратора и наносят на колонку. Промывают колонку 15 куб. см гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 5 куб. см смеси гексан:ацетон - 3:2, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 20 куб. см смеси гексан:ацетон - 2:3, отбирая последовательно по 5 куб. см элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

Сухой остаток в концентраторах растворяют в 2 куб. см ацетона и вводят в хроматограф 1 куб. мм. По результатам обнаружения Метамитрона в каждой фракции определяют объем смеси гексан:ацетон - 2:3, необходимый для полного вымывания Метамитрона.

Примечание: Проверку хроматографического поведения Метамитрона следует проводить обязательно при постановке методики и/или получении новой партии Флоризила, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

7.3.1. Приготовление 2%-ного раствора хлористого натрия

20 г хлористого натрия вносят в мерную колбу на 1 куб. дм, добавляют 600 - 700 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения соли и доводят водой до метки.

50 мг Метамитрона (аналитического стандарта) взвешивают в мерной колбе вместимостью 50 куб. см, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 ацетоном готовят рабочие растворы Метамитрона с концентрацией 0,3; 0,6; 1,5; 3,0 мкг/куб. см, которые могут храниться в холодильнике не более 30 сут.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Метамитрона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,3; 0,6; 1,5; 3,0 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 26766-85, 1722-85 "Свекла столовая свежая. ТУ" и ГОСТ 28736-90 "Корнеплоды кормовые".

Пробы ботвы и корнеплодов столовой и кормовой свеклы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С.

9.1.1. Экстракция гербицида из анализируемой пробы

Навеску измельченной ботвы и корнеплодов столовой и кормовой свеклы массой 20 г помещают в полипропиленовые банки объемом 250 куб. см, заливают 70 куб. см (для ботвы) или 50 куб. см (для корнеплодов) ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт отфильтровывают через воронку с бумажным фильтром в концентратор емкостью 250 куб. см. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 куб. см ацетонитрила и встряхивая смесь в течение 15 мин.

Экстракты отфильтровывают и объединяют в концентраторе. Растворитель выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до водного остатка. (Выпаривание проводить осторожно, так как возможно вспенивание ацетонитрила.)

Добавляют в концентратор 5 куб. см ацетонитрила, обмывают стенки концентратора, приливают 50 куб. см 2%-ного раствора хлористого натрия, перемешивают содержимое и переносят в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Приливают в делительную воронку 50 куб. см хлористого метилена и встряхивают воронку в течение 1 - 2 минут. После разделения слоев нижний слой хлористого метилена сливают в концентратор емкостью 250 куб. см через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 куб. см хлористого метилена. Экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

9.1.2. Очистка экстракта на набивной колонке, заполненной Флоризилом

Сухой остаток в концентраторе разводят в 2 куб. см ацетона, добавляют 8 куб. см гексана, перемешивают содержимое, обмывая стенки концентратора, и наносят на колонку с Флоризилом. Промывают колонку 15 куб. см гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 5 куб. см смеси гексан:ацетон - 3:2, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 15 куб. см смеси гексан:ацетон - 2:3, собирая элюент в концентратор, и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетона и вводят в хроматограф 1 куб. мм.

Капиллярная кварцевая колонка DB-1701 (14% цианопропилфенил - 86% метилсиликон), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 180 °С, выдержка - 4 мин.; нагрев колонки по 25 °С/мин. до 270 °С; выдержка 5 мин.

Продувка детектора после анализа азотом - 65 куб. см/мин. в течение 3 минут с нагревом колонки до 280 °С.

Температура испарителя - 280 °С, детектора - 370 °С.

Регулятор расхода гелия - РРГ-11; режим - Splitless.

Газ 1 - гелий, линейная скорость - 23 см/сек., давление на входе - 32,84 кПа.

Газ 2 - гелий (продувка испарителя), расход - 1,0 куб. см/мин.; сброс 1:60.

Газ 3 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 45 куб. см/мин.

Расход водорода - 16 куб. см/мин., воздуха - 180 куб. см/мин.

Абсолютное время удерживания Метамитрона - 8 мин. 49 сек.

Минимально детектируемое количество Метамитрона в анализируемом объеме - 0,3 нг.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,3 - 5,0 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Метамитрона 5,0 мкг/куб. см соответственно, разбавляют.

Количественное определение Метамитрона проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов Метамитрона с концентрацией 0,03 - 5,0 мкг/куб. см.

Для определения содержания Метамитрона в пробах методом ГЖХ используют следующую формулу:

где:

Х - содержание Метамитрона в пробе, мг/кг;

Sст - площадь пика стандарта, мВ;

Sпр - площадь пика образца, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г;

Р - содержание Метамитрона в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,03 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,03 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".