"МУК 4.1.1795Б-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение аверсектина С (по авермектину В1А) в почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 11.12.2003)

1. Подготовлены Российским государственным медицинским университетом (Е.Б. Гугля).

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 11 декабря 2003 г. и введены в действие с 1 марта 2004 г.

3. Введены впервые.

Аверсектин С - порошок белого или желтовато-белого цвета, легко растворим в хлорированных углеводородах, ацетоне, бензоле, растворим в низших спиртах, практически не растворим в воде, петролейном эфире. Температуры плавления авермектинов (с разложением) составляют около 150 °С.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 23%, при доверительной вероятности 0,95.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005-88.

При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и влажности воздуха не более 80%.

Перед выполнением измерений проводят приготовление растворов, подготовку прибора, установление градуировочной характеристики, подготовку концентрирующих патронов, отбор проб.

Градуировочные растворы готовят разбавлением стандартного раствора N 2 в мерных колбах объемом 25 куб. см согласно табл. 2. Вносят пипеткой рабочий раствор в мерные колбы вместимостью 25 куб. см в соответствии с табл. 2, доводят уровень ацетонитрилом до метки и перемешивают. Градуировочные растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

Реакционную смесь готовят из трифторуксусного ангидрида и ацетонитрила в соотношении 1:2. Смесь готовят в день работы, помещают в холодильник при 0 °С и не хранят.

Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 490 куб. см метилового спирта и 10 куб. см воды. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора для фильтрации.

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

Для построения градуировочной характеристики отбирают по 2,0 куб. см каждого градуировочного раствора, помещают в центрифужные пробирки и упаривают досуха на вакуумном испарителе. В каждую пробирку с сухим остатком вносят по 0,5 куб. см ацетонитрила, пробирку энергично встряхивают и обрабатывают ультразвуком в течение 30 с. Затем пробирку повторно встряхивают и повторно обрабатывают ультразвуком. В каждую пробирку вносят по 0,05 куб. см 1-метилимидазола. Пробирку закрывают, тщательно перемешивают содержимое в течение 5 - 10 с, обрабатывают ультразвуком, центрифугируют и помещают в холодильник при 0 °С на 10 минут. После охлаждения в пробирку с образцом вносят 0,15 куб. см охлажденной реакционной смеси. Пробирку закрывают и выдерживают в холодильнике в течение 1 часа. Общий объем раствора пробы после проведения реакции - 0,7 куб. см.

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Проверку градуировочной характеристики проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

Пробы почвы отбирают с 2 - 3 площадок размером 25 кв. м каждая. С каждой площадки отбирают смешанный образец почвы, состоящий из 5 проб, взятых по методу конверта (по углам и в центре). Пробы отбирают лопатой на глубину пахотного слоя 20 - 25 см или, при изучении распространения химических загрязнений в глубину, буром на уровнях 0,25 - 0,5 - 0,75 и так до 2 м. Почву обрезают лопатой в виде прямоугольной пластины и следят за тем, чтобы в каждый образец попало примерно равное количество почвы верхнего и нижнего слоев. Отобранные пробы помещают в полиэтиленовые мешочки. Пробы пронумеровывают, на схематическом чертеже изучаемой территории делают соответствующие обозначения. Отобранные пробы следует защищать от нагрева и освещения солнечными лучами и срочно направлять в лабораторию с сопроводительным бланком.

Поступившие в лабораторию образцы почвы из одного изучаемого участка взвешивают, затем тщательно перемешивают все вместе и освобождают от посторонних примесей (камни, шлак, растения и т.д.). После перемешивания почву пропускают через сито с отверстиями 3 мм. Из общей массы методом квартования (деления на 4 части и отбора одной или двух противоположных частей) берут 1,0 - 1,5 кг почвы для исследования.

Непосредственно перед проведением измерения активируют патроны, для чего снимают заглушки с патронов; через патрон Диапак С16 пропускают последовательно 5 куб. см ацетонитрила и 5 куб. см воды, через патрон Диапак СN - 5 куб. см ацетонитрила.

Приготовленные соответствующим образом образцы почвы высушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре, просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, после чего растирают в ступке до состояния пудры. Навеску массой 2 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 100 куб. см, заливают 20 куб. см этилацетата и оставляют на сутки или же встряхивают колбу в течение часа. Экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия и фильтровальную бумагу в колбу емкостью 50 куб. см. Пробу почвы повторно экстрагируют таким же способом, экстракты объединяют. Отбирают с помощью мерного цилиндра 28 куб. см экстракта, переносят в круглодонную колбу емкостью 50 куб. см и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетонитрила и переносят в делительную воронку. Экстракт промывают 5 раз порциями гексана по 10 куб. см. Гексановые фракции отбрасывают.

Ацетонитрильную фракцию упаривают и снова растворяют в 5 куб. см ацетонитрила и добавляют к этому раствору 10 куб. см дистиллированной воды. Раствор пропускают через предварительно активированный патрон Диапак С16. Сорбированную пробу элюируют с патрона Диапак С16 20 куб. см ацетонитрила через присоединенный патрон Диапак NН. Элюат собирают в пробирку и упаривают досуха. Проводят дериватизацию аналогично тому, как описано в п. 7.3 для градуировочных растворов.

где:

а - содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

б - объем пробы, взятой для хроматографирования, куб. см;

в - общий объем раствора пробы после проведения химической реакции, куб. см;

г - объем растворителя при экстракции из почвы, куб. см;

д - объем экстракта, отобранного для упаривания, куб. см;

М - навеска пробы почвы, подготовленная для анализа, г.

Результаты измерений оформляют протоколом по форме:

Ответственный исполнитель:

Научный руководитель:

Метрологическую аттестацию проводят в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96, МИ 2336-95 и МИ 2335-95. Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 3 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С. Концентрацию определяют как среднеарифметическое результатов параллельных определений.

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже чем 1 раз в месяц.

Внутренний оперативный контроль точности проводят не реже чем 1 раз в месяц.

Методические указания разработаны: ООО НБЦ "Фармбиомед" (В.Т. Тер-Симонян, Е.Б. Кругляк), Российский государственный медицинский университет (Е.Б. Гугля).

1. Diserens Н., Henzelin М. //Journal of Chromatography А., 1999. V. 833. N 1. Р. 13 - 18.

2. Руководство по контролю загрязнения атмосферы. РД 52.04.186-96. М., 1991, 693 с.

3. Agency for Toxic Substances and Disease Registry. Atlanta, 1989 and 1990, 184 с.

4. Дмитриев М.Т., Казнина Н.И., Пинигина И.А. Санитарно-химический анализ загрязняющих веществ в окружающей среде. Справ, изд. М.: Химия, 1989, 368 с.

5. ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ. Методики выполнения измерений.

6. ГОСТ 17.2.4.02-81. Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ. М.: Изд-во стандартов, 1981, 3 с.

7. МИ 2336-95. Рекомендация ГСИ. Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания. Екатеринбург, 1995, 44 с.

8. МИ 2335-95. Рекомендация ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа. Екатеринбург, 1995, 56 с.