"МУК 4.1.1635-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций пиразин-3-карбоксамида (пиразинамида) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 29.06.2003)

1. Методические указания подготовлены творческим коллективом специалистов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Л.Г. Макеева - руководитель, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Г.Ф. Громова) при участии А. И. Кучеренко (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).

2. Рекомендованы к утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме "Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции "Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

3. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.

4. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 29.06.03.

5. Введены впервые.

Методические указания "Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 42) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник 29 методик контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений", МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа", МИ 2336-95 "Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах - ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны", ГН 2.2.5.1314-03 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и дополнениях N 1 к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Настоящие Методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание пиразинамида в диапазоне концентраций от 1,5 до 30,0 мг/куб. м.

2.1. Структурная формула (не приводится).

2.3. Молекулярная масса: 123,1.

2.4. Регистрационный номер CAS 98-96-4.

2.5. Физико-химические свойства.

Пиразинамид - кристаллический порошок белого или со слегка желтоватым оттенком цвета, температура плавления 188 - 191 °С. Растворим в воде, в смеси ацетонитрила и воды (элюенте), малорастворим в этиловом спирте и хлороформе. Водный раствор имеет слабокислую реакцию.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Пиразинамид обладает общетоксическим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в воздухе рабочей зоны - 3 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций пиразинамида с погрешностью не более +/- 14% при доверительной вероятности 0,95.

Измерения массовых концентраций пиразинамида основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 268 нм.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания пиразинамида в хроматографируемом объеме раствора - 0,020 мкг.

Нижний предел измерения концентрации пиразинамида в воздухе - 1,5 мг/куб. м (при отборе 100 куб. дм воздуха).

Определению не мешают крахмал, тальк, целлюлоза микрокристаллическая, титана оксид, поливинилпирролидон низкомолекулярный.

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных Методических указаний.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим и средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1.1. Стандартный раствор пиразинамида в растворе элюента концентрацией 200 мкг/куб. см готовится растворением 10 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 куб. см. Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.2. Раствор дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в 500 куб. см дистиллированной воды в колбе данного объема.

9.1.3. Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 80 куб. см 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 20 куб. см ацетонитрила. Раствор доводят до рН 4 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью устройства для фильтрации и фильтров "Владипор" и дегазируют под вакуумом.

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора согласно табл. 1. Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: ацетонитрил - 0,02 М дигидрофосфата калия, 2:8, рН 4;

скорость потока элюента - 100 куб. мм /мин.;

объем вводимой пробы - 2 куб. мм;

длина волны спектрофотометрического детектора - 268 нм;

время удерживания пиразинамида - 2 мин. 20 с.

На полученной хроматограмме измеряют высоты пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и растворителя, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную кривую зависимости площади пика от количества компонента в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Проверку градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Воздух с объемным расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА ВП-10. Для измерения концентрации пиразинамида на уровне 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 100 куб. дм. Пробы можно хранить в течение трех суток.

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и приливают пипеткой 7,5 куб. см раствора элюента. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин. и сливают его в пробирку. Аналогичным образом проводят повторную экстракцию с фильтра и объединяют растворы. Степень десорбции пиразинамида с фильтра 96%. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Концентрацию пиразинамида (С, мг/куб. м) в воздухе вычисляют по формуле:

где:

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятой для хроматографирования, куб. см;

в - общий объем раствора пробы, куб. см;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, куб. дм (см. Прилож. 1).

Результат количественного анализа представляют в виде (С +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. м, Р = 0,95, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, ДЕЛЬТА = 0,001 + 0,14С.

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 3 ч.

Методические указания разработаны Российским государственным медицинским университетом (Е.Б. Гугля).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле: