"МУК 4.1.1620-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций [1S-[1-альфа,3-альфа,7-бета,8-бета(2S*,4S*),8-альфа-бета]]-1,2,3,7,8,8-альфа-гексагидро-3,7-диметил-8-[2(тетрагидро-4-гидрокси-6-оксо-2Н-пиран-2-ил)этил]-1-нафталенил 2,2-диметилбутаноата (симвастатин) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 29.06.2003)

1. Методические указания подготовлены творческим коллективом специалистов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Л.Г. Макеева - руководитель, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Г.Ф. Громова) при участии А. И. Кучеренко (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).

2. Рекомендованы к утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме "Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции "Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

3. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.

4. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 29.06.03.

5. Введены впервые.

Методические указания "Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 42) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник 29 методик контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений", МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа", МИ 2336-95 "Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах - ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны", ГН 2.2.5.1314-03 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и дополнениях N 1 к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Настоящие Методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание симвастатина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,015 - 0,300 мг/куб. м.

2.1. Структурная формула (не приводится).

2.3. Молекулярная масса 418,58.

2.4. Регистрационный номер CAS 79902-63-9.

2.5. Физико-химические свойства.

Симвастатин - белый или не совсем белый кристаллический порошок. Температура плавления - 135 - 138 °С. Практически нерастворим в воде, растворим в растворе калия фосфата с ацетонитрилом, хорошо растворим в хлороформе, метиловом и этиловом спиртах.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Симвастатин - сердечно-сосудистый гиполипидемический препарат, обладает гипохолестеринемическим, иммунотоксическим, гонадотропным, кожно-резорбтивным, кожно-раздражающим, общетоксическим (оказывает влияние на функцию печени и почек) действием. При длительном воздействии может вызвать мышечную слабость, ригидность мышц, миалгию.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) симвастатина в воздухе рабочей зоны - 0,03 мг/куб. м; класс опасности - первый.

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций симвастатина с погрешностью, не превышающей +/- 20%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения массовой концентрации симвастатина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Измерение проводят при длине волны 238 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания симвастатина в хроматографируемом объеме пробы (10 куб. мм) - 0,03 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации симвастатина в воздухе - 0,015 мг/куб. м (при отборе 1000 куб. дм воздуха).

Метод специфичен в условиях производства таблеток симвастатина.

Определению не мешают крахмал картофельный, целлюлоза микрокристаллическая, лактоза, магний стеариновокислый.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы.

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими, метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в данном разделе.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа высокого давления соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе высокого давления.

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе высокого давления проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа высокого давления, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1.1. Основной стандартный раствор симвастатина с концентрацией 500 мкг/куб. см готовят растворением 0,0500 г вещества в растворе калия фосфата с ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор помещают в ультразвуковую баню на 5 мин., перемешивают и хранят в течение 7 суток в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор симвастатина N 1 с концентрацией 100 мкг/куб. см готовят разбавлением 5 куб. см основного стандартного раствора раствором калия фосфата с ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 25 куб. см. Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор симвастатина N 2 с концентрацией 30 мкг/куб. см готовят разбавлением 15 куб. см стандартного раствора N 1 раствором калия фосфата с ацетонитрилом в мерной колбе вместимостью 50 куб. см. Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.4. 0,1%-й водный раствор кислоты ортофосфорной. В мерную колбу вместимостью 500 куб. см приливают 300 куб. см дистиллированной воды, добавляют 0,294 куб. см концентрированной фосфорной кислоты (плотность 1,70), доводят объем раствора дистиллированной водой до 500 куб. см и перемешивают. Раствор устойчив 7 суток.

9.1.5. 0,1%-й раствор кислоты ортофосфорной в ацетонитриле. В мерную колбу вместимостью 500 куб. см приливают 300 куб. см ацетонитрила, добавляют 0,294 куб. см концентрированной фосфорной кислоты (плотность 1,70), доводят объем раствора ацетонитрилом до 500 куб. см и перемешивают. Раствор устойчив 7 суток.

Элюент: 0,1%-й раствор кислоты ортофосфорной, 0,1%-й раствор кислоты ортофосфорной в ацетонитриле и ацетонитрил в соотношении 7:5:5 (по объему). Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью фильтров типа "Миллипор" или "Владипор" и дегазируют пропусканием гелия в течение 15 мин.

Растворитель: смесь раствора калия фосфата однозамещенного (А) и ацетонитрила (В).

А. Раствор калия фосфата однозамещенного. В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 0,7 г калия фосфата однозамещенного, прибавляют 300 куб. см дистиллированной воды, взбалтывают, доводят рН кислотой ортофосфорной до 4,0 +/- 0,02, после чего доводят объем раствора дистиллированной водой до 500 куб. см и перемешивают. Раствор устойчив 7 суток.

В. Ацетонитрил. А:В = 40:60 (по объему). Непосредственно перед измерением в мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 200 куб. см раствора А, прибавляют раствор В (ацетонитрил) до 500 куб. см и перемешивают. Затем раствор фильтруют с помощью фильтров типа "Миллипор" или "Владипор" и дегазируют пропусканием гелия в течение 15 мин.

Подготовку к работе жидкостного хроматографа высокого давления проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала (в приборных единицах) от массы симвастатина в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием 6 серий градуировочных растворов из 5 параллельных определений для каждой серии, согласно табл. 1.

Растворы применяют свежеприготовленными.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

температура термостата колонки - 20 °С;

скорость подачи элюента - 1,8 куб. см/мин.;

чувствительность измерения детектора - 0,1 ABS;

длина волны УФ-детектора - 238 нм;

скорость движения диаграммной ленты - 4,55 мм/мин.;

максимальный объем вводимой пробы - 10 куб. мм;

время удерживания симвастатина - 9 мин. 8 с;

эффективность колонки - не менее 2000 т. т.

Проверку градуировочного графика проводят не реже 1 раза в месяц или в случае использования новой партии реактивов, или после ремонта прибора.

Воздух с объемным расходом 100 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ПДК симвастатина следует отобрать 1000 куб. дм воздуха. Отобранные пробы могут храниться в течение недели в бюксах с пришлифованными крышками.

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой вместимостью 25 куб. см, приливают 5 куб. см раствора калия фосфата с ацетонитрилом, помещают в ультразвуковую баню и оставляют на 15 мин. Затем фильтр тщательно отжимают стеклянной палочкой и удаляют. Полученный раствор перемешивают, фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 10 куб. см, доводят до 5 куб. см раствором калия фосфата с ацетонитрилом и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. Степень десорбции вещества с фильтра 98%.

Хроматографирование анализируемых растворов проб проводят в тех же условиях, что и при построении градуировочной характеристики.

Количественное определение содержания симвастатина (мкг) в хроматографируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Анализируемый раствор фильтруют для удаления нерастворимых в растворе калия фосфата с ацетонитрилом вспомогательных веществ, присутствующих в таблетках симвастатина.

Массовую концентрацию симвастатина (С, мг/куб. м) в воздухе вычисляют по формуле:

где:

а - содержание симвастатина в хроматографируемом объеме раствора, найденное по градуировочному графику, мкг;

в - общий объем раствора пробы, куб. см;

б - хроматографируемый объем раствора, куб. см;

V - объем воздуха, отобранного для анализа (куб. дм) и приведенного к стандартным условиям (см. Прилож. 1).

Результат количественного анализа представляют в виде (С +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. м, Р = 0,95. Значение ДЕЛЬТА = 0,0003 + 0,20С мг/куб. м, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности.

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны.

Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля и устраняют их.

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 5 ч.

Методические указания разработаны Государственным унитарным предприятием "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (В.П. Жестков, А.П. Крымов, В.Ф. Алещенко, Л.И. Крымова).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле: