"МУК 4.1.1622-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций 4-гидрокси-N,N-диметил-4-(4-хлорфенил)-альфа,альфа-дифенил-1-пиперидинбутанамида гидрохлорида (лоперамида гидрохлорид) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 29.06.2003)

1. Методические указания подготовлены творческим коллективом специалистов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Л.Г. Макеева - руководитель, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Г.Ф. Громова) при участии А. И. Кучеренко (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).

2. Рекомендованы к утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме "Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции "Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

3. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.

4. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 29.06.03.

5. Введены впервые.

Методические указания "Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 42) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник 29 методик контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений", МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа", МИ 2336-95 "Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах - ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны", ГН 2.2.5.1314-03 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и дополнениях N 1 к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Настоящие Методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание лоперамида гидрохлорида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,015 - 0,300 мг/куб. м.

2.1. Структурная формула (не приводится).

2.3. Молекулярная масса: 513,51.

2.4. Регистрационный номер CAS 34552-83-5.

2.5. Физико-химические свойства.

Лоперамида гидрохлорид - белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок с температурой плавления 225 °С (с разложением). Легко растворим в метиловом, 95%-м этиловом, изопропиловом спиртах и хлороформе, растворим в смеси ацетонитрил-дистиллированная вода, мало растворим в воде и разведенных кислотах.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Лоперамида гидрохлорид относится к группе опиоидных синтетических наркотических анальгетиков, производное фенилпиперидина, обладает антидиарейным действием, умеренно опасен при введении внутрь, умеренно токсичен при внутрибрюшинном введении, обладает общетоксическим и слабым местнораздражающим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в воздухе рабочей зоны 0,03 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций лоперамида гидрохлорида с погрешностью, не превышающей +/- 19%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения массовой концентрации лоперамида гидрохлорида выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Измерение проводят при длине волны 220 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания лоперамида гидрохлорида в хроматографируемом объеме раствора (20 куб. мм) - 0,05 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации лоперамида гидрохлорида в воздухе - 0,015 мг/куб. м (при отборе 833 куб. дм воздуха).

Метод специфичен в условиях производства капсул лоперамида.

Определению не мешают крахмал, тальк, лактоза, магний стеариновокислый.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы.

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими, метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в данном разделе.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа высокого давления соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией но эксплуатации прибора.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе высокого давления.

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе высокого давления проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, растворителя и подвижной фазы, подготовка жидкостного хроматографа высокого давления, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1.1. Основной стандартный раствор лоперамида гидрохлорида с концентрацией 500 мкг/куб. см готовят растворением 0,0500 г вещества в смеси ацетонитрил-дистиллированная вода в соотношении (1:1) по объему в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор помещают на ультразвуковую баню на 15 мин. перемешивают и хранят в течение недели в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор лоперамида гидрохлорида N 1 с концентрацией 100 мкг/куб. см готовят разбавлением 10 куб. см основного стандартного раствора смесью ацетонитрил-дистиллированная вода в соотношении (1:1) в мерной колбе вместимостью 50 куб. см. Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор лоперамида гидрохлорида N 2 с концентрацией 25 мкг/куб. см готовят разбавлением 25 куб. см стандартного раствора N 1 смесью ацетонитрил-дистиллированная вода в соотношении (1:1) в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.4. Растворитель: помещают 500 куб. см ацетонитрила в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 куб. см, перемешивают, пропускают через фильтр типа "Миллипор" или "Владипор" и дегазируют.

9.1.5. Элюент: помещают 500 куб. см ацетонитрила в колбу вместимостью 1000 куб. см, доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 куб. см, добавляют 1 куб. см ортофосфорной кислоты, перемешивают, пропускают через фильтр типа "Миллипор" или "Владипор" и дегазируют.

Подготовку жидкостного хроматографа высокого давления проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (в приборных единицах) от массы лоперамида гидрохлорида в хроматографируемом объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием 6 серий градуировочных растворов из 5 параллельных определений для каждой серии согласно табл. 1.

Растворы применяют свежеприготовленными.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых растворов проб:

температура термостата колонки - 40 °С;

скорость подачи элюента - 2 куб. см/мин.;

чувствительность измерения детектора - 0,02 - 0,1 ABS;

длина волны УФ-детектора - 220 нм;

скорость движения диаграммной ленты - 4,25 мм/мин.;

максимальный объем вводимой пробы - 20 куб. мм;

время удерживания лоперамида гидрохлорида - 7 мин. 14 с;

эффективность колонки - не менее 600 т. т.

Проверку градуировочного графика проводят не реже 1 раза в месяц или в случае использования новой партии реактивов, или после ремонта прибора.

Воздух с объемным расходом 100 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ лоперамида гидрохлорида следует отобрать 833 куб. дм воздуха. Отобранные пробы могут храниться в течение трех суток в бюксах с пришлифованными крышками.

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой вместимостью 25 куб. см, приливают 5 куб. см смеси ацетонитрил-дистиллированная вода в соотношении (1:1), помещают в ультразвуковую баню и оставляют на 15 мин. Затем раствор перемешивают, фильтр тщательно отжимают стеклянной палочкой и удаляют. Раствор фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку вместимостью 10 куб. см, доводят смесью ацетонитрил-дистиллированная вода до 5 куб. см и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. Степень десорбции вещества с фильтра 98%.

Хроматографирование анализируемых растворов проб проводят в тех же условиях, что и при построении градуировочной характеристики.

Количественное определение содержания лоперамида гидрохлорида (мкг) в хроматографируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Анализируемый раствор фильтруют для удаления нерастворимых в смеси ацетонитрил-дистиллированная вода вспомогательных веществ, присутствующих в капсулах лоперамида гидрохлорида.

Массовую концентрацию лоперамида гидрохлорида (С, мг/куб. м) в воздухе вычисляют по формуле:

где:

а - количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора пробы по градуировочному графику, мкг;

б - хроматографируемый объем раствора пробы, взятый для анализа, куб. см;

в - общий объем анализируемого раствора, куб. см;

V - объем воздуха, отобранного для анализа (куб. дм) и приведенного к стандартным условиям (см. Прилож. 1).

Результат количественного анализа представляют в виде (С +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. м, Р = 0,95. Значение ДЕЛЬТА = 0,00084 + 0,19С (мг/куб. м), где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности.

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны.

Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля и устраняют их.

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 5 ч.

Методические указания разработаны Государственным унитарным предприятием "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (В.П. Жестков, А.П. Крымов, В.Ф. Алещенко, Л.И. Крымова).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле: