"МУК 4.1.1608-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по хроматографическому измерению концентраций N-(4-[2-(5-хлор-2-метоксибензамидо)-этил]-бензол-сульфонил)-N'-циклогексилмочевины (глибенкламид) в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом России 29.06.2003)

Утверждены Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, Председателем Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко в июне 2003 г.

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (сборник 38) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Методические указания разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и меньше их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в ГН 2.2.5.686-98 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.687-98 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Структурная формула (не приводится).

Глибенкламид - белый или белый со слабым кремовым оттенком тонкодисперсный порошок без запаха, горького вкуса, легко растворим в диметилформамиде, умеренно растворим в хлороформе, растворим в этиловом спирте, практически не растворим в воде. Температура плавления 167 - 171 °C.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает гипогликемическим действием.

ОБУВ в воздухе - 0,01 мг/куб. м.

Определение основано на хроматографировании пробы в тонком слое силикагеля восходящим методом в смеси растворителей хлороформ-гептан-ацетон-кислота уксусная ледяная (60:20:20:2), проявлении хроматограммы ультрафиолетовым светом и обнаружении глибенкламида в виде темных пятен.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания глибенкламида в анализируемом объеме раствора - 1 мкг.

Нижний предел измерения концентраций глибенкламида в воздухе - 0,005 мг/куб. м (при отборе 300 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе от 0,005 до 0,050 мг/куб. м.

Определению не мешает 4-[2-(5-хлор-2-метоксибензамидо)этил]-бензолсульфонамид и циклогексилизоцианат.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 18%.

Время измерения, включая отбор проб, 3 часа.

Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, ТУ 16-535-230-74.

Аспирационное устройство, ГОСТ 17.2.6.01-86.

Фильтродержатели, ТУ 95.72.05-77.

Хроматографическая камера, ГОСТ 25336-82Е.

Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.

Чашки фарфоровые диаметром 40 - 50 мл, ГОСТ 9147-80Е.

Бюксы вместимостью 10 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Колбы мерные вместимостью 25 мл, ГОСТ 1770-74Е.

Пипетки вместимостью 1, 5 мл, ГОСТ 29227-91.

Микропипетки с оттянутым концом вместимостью 0,1 мл, ГОСТ 1770-74Е.

Хроматоскоп.

Глибенкламид, ВФС 42-1184-82.

Спирт этиловый, ГОСТ 5962-67.

Хлороформ, ГОСТ 20015-74.

Гептан, ГОСТ 25828-83.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.

Стандартный раствор N 1 с концентрацией глибенкламида 1 мг/мл готовят растворением 0,025 г глибенкламида в этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией глибенкламида 200 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 этиловым спиртом. Растворы устойчивы в течение 2 час. при хранении в темном месте.

Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.

Хроматографические пластинки Силуфол УФ-254 (15 х 15 см).

Воздух с объемным расходом 20 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 0,5 ОБУВ достаточно отобрать 300 л воздуха. Отобранные пробы хранят в темном месте не более месяца.

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс, заливают 4 мл этилового спирта и растворяют пробу в течение 2 мин., периодически помешивая стеклянной палочкой. Степень десорбции глибенкламида с фильтра составляет 98,5%. Затем, отжав фильтр стеклянной палочкой, извлекают его, переносят раствор в фарфоровую чашку и выпаривают на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,15 мл этилового спирта.

На хроматографической пластинке отмечают стартовую линию на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки и при помощи микропипетки на середину стартовой линии наносят 0,1 мл пробы в одну точку так, чтобы размер пятен не превышал 10 мм и слой сорбента при этом не нарушался. Справа и слева от пробы на расстоянии 1,5 - 2 см наносят, как описано выше, 0,005; 0,010; 0,020; 0,030; 0,040 и 0,050 мл стандартного раствора N 2 глибенкламида, что соответствует 1, 2, 4, 6, 8 и 10 мкг препарата.

Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, на дно которой за 30 мин. до хроматографирования налита смесь растворителей хлороформ-гептан-ацетон-кислота уксусная ледяная (60:20:20:2). После того как фронт растворителя достигает верхнего края пластинки, ее вынимают из камеры и сушат на воздухе. При облучении пластинки УФ-светом глибенкламид проявляется в виде темных пятен на белом фоне.

Количественное определение проводят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятна пробы с пятнами стандартных растворов глибенкламида.

Концентрацию глибенкламида (С) в воздухе в мг/куб. м вычисляют по формуле:

где:

а - содержание глибенкламида, найденное в анализируемом объеме пробы, мкг;

в - общий объем пробы, мл;

б - объем пробы, взятый для анализа, мл;

V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °C и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле:

Белая магнезия

Бромгексин

Бура

Гидразинобензол солянокислый

Глибенкламид

Диэтиламинопропиламин

Иминодибензил

Лидокаин

Метаран

МЦ-100

Масло "Турбомас"

Неопентилгликоль

Нимодипин

Нитрендипин

Нитроглицерин

Оксипропилметилцеллюлоза

Ондансетрон

Ранитидин гидрохлорид

Реагент ААК или Таллактам

СМБА

Сульфаметоксазол

Тамоксифен основание

Тамоксифен цитрата

Тиаприд

Триметоприм

Хладон-14

Ципрофлоксацин гидрохлорида моногидрат

Экосорб

Эналаприла малеат

Этиниловый спирт

Оперативный контроль погрешности (точности) проводят в одинаковых условиях, т.е. результаты анализа получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

При осуществлении ВОК воспроизводимости отбирают две пробы, объем которых равен объему, необходимому для проведения анализа по методике, и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа, используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. В работе должны участвовать два аналитика.

При превышении норматива ВОК воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.