"МУК 4.1.2937-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений остаточного содержания тиаклоприда в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Тиаклоприд - инсектицид нервно-паралитического действия, эффективно уничтожает тлю, цветоеда, минеров, трипсов, плодожорку, колорадского жука на хлопчатнике, табаке, картофеле, рисе, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода.

Применяется в России в качестве инсектицида для обработки яблоневых садов при норме расхода до 200 г д.в./га и одно-двукратной обработке за сезон.

Свидетельство о метрологической аттестации от 14.12.2010 N 01.00225/79-10.

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой доли тиаклоприда в клубнях картофеля в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Название вещества по ИСО: Тиаклоприд.

Название вещества по ИЮПАК: (Z)-3-(6-хлор-3-пиридилметил)-1,3-тиазолидин-2-илиденцианамид.

Структурная формула (не приводится).

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Метод основан на экстракции тиаклоприда из клубней картофеля водным ацетоном, очистке экстракта, содержащего тиаклоприд, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем, с последующим измерением содержания тиаклоприда в очищенном экстракте на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками, аналогичными приведенным в разделе 4.

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91, и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха (20 +/- 5) °C;

- атмосферное давление 84 - 106 кПа;

- относительная влажность воздуха не более 80%.

7.2. Условия хроматографического анализа

Температура колонки: 27 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (с объемным соотношением компонентов 43:57).

Скорость потока элюента: 0,5 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 242 нм.

Чувствительность детектора: 0,002 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.

Время удерживания тиаклоприда: (6,1 +/- 0,2) мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

Приготовление раствора гидроксида натрия с массовой долей 2%

Навеску (2 +/- 0,1) г гидроксида натрия в конической колбе растворяют в 40 - 60 куб. см деионизированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора - 1 месяц.

Хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, раствором гидроксида натрия с массовой долей 2% и снова водой до нейтральной реакции промывных вод, после чего сушат над поташом и перегоняют.

Силикагель 60 (0,063 - 0,2 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5-м объемом ацетона, высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 5 - 6 ч и затем активируют при температуре 130 °C в течение 5 ч.

В коническую колбу вместимостью 250 куб. см вносят навеску (50 +/- 2) г хлорида натрия, приливают 100 куб. см дистиллированной воды, перемешивают в течение 5 мин., полученный раствор фильтруют. Фильтрат является насыщенным раствором хлорида натрия. Срок годности раствора - 1 неделя.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 430 куб. см ацетонитрила, 570 куб. см деионизированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.

Хроматографическую колонку Symmetry C18 устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °C и скорости потока подвижной фазой 0,5 куб. см/мин. не менее часа до установления стабильной базовой линии.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 2 г силикагеля в 20 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 0,5 см. Колонку промывают 30 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора N 1 тиаклоприда с концентрацией 10 мкг/куб. см в ацетонитриле (п. 8.6.2) и отдувают растворитель током азота. Остаток растворяют в 0,6 куб. см ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 куб. см гексана, перемешивают и вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 8.4. Промывают колонку 50 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 50 куб. см смеси гексан-ацетон (7:3, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 1 куб. см подвижной фазы, подготовленной по п. 8.2, перемешивают и хроматографируют в соответствии с условиями п. 7.2.

По результатам обнаружения тиаклоприда в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-ацетон (7:3, по объему), необходимый для полного вымывания тиаклоприда из колонки.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,0100 +/- 0,0001) г тиаклоприда, растворяют в 40 - 50 куб. см ацетонитрила, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят при температуре минус 18 °C. Срок хранения - не более 2 месяцев.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора тиаклоприда с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 8.6.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.

Градуировочный раствор N 1 тиаклоприда хранят при температуре не выше минус 18 °C. Срок хранения - не более 1 месяца.

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора N 1 тиаклоприда с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (8.6.2), доводят объем до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией тиаклоприда 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед употреблением.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ x с) от концентрации тиаклоприда в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 5 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 8.6.3) и анализируют при условиях п. 7.2. Осуществляют не менее 3 параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79) и правилами, определяемыми ГОСТ Р 51808-2001 "Картофель свежий продовольственный, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ", 7176-85 "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ", 26832-86 "Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ" и 6014-68 "Картофель свежий для переработки. ТУ".

Пробы клубней картофеля хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре минус 18 °C. Перед анализом клубни измельчают ножом или с помощью терки.

Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (9:1, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 30 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 куб. см. Растительный материал повторно экстрагируют 50 куб. см смеси ацетон-вода (9:1, по объему) в течение 30 мин. при встряхивании, и суспензию фильтруют. Фильтраты переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/10 его часть, эквивалентную 2 г образца, переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

Экстракт, полученный по п. 9.1 и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (~ 1 куб. см) при температуре не выше 40 °C. К водному остатку прибавляют 10 куб. см дистиллированной воды, 20 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 25 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фракцию, пропущенную через слой безводного сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 0,6 куб. см ацетона, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., добавляют 2,4 куб. см гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.4. Колбу обмывают 5 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 40 куб. см смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Тиаклоприд элюируют с колонки 45 куб. см смеси гексан-ацетон (7:3, по объему), отбрасывая первые 5 куб. см элюата и собирая последующие 40 куб. см непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток экстракта клубней картофеля растворяют в 1 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по п. 8.2, раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. и анализируют на содержание тиаклоприда по п. 10.

Полнота извлечения тиаклоприда при проведении всех операций подготовки пробы не менее 83%.

10.1. В инжектор хроматографа вводят 5 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (пп. 9.1 - 9.3), анализируют при условиях (п. 7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждого образца клубней картофеля повторяют операции по пп. 9.1 - 9.3, 10.1.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программное обеспечение "Breeze".

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации тиаклоприда в экстракте, C, мкг/куб. см.

Массовую долю тиаклоприда X (мг/кг) в образцах клубней картофеля рассчитывают по формуле (2):

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (3):

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

11.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале:

"массовая доля тиаклоприда в клубнях картофеля менее 0,01 мг/кг (более 0,10 мг/кг)".

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал тиаклоприда, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют и анализируют в соответствии с данной методикой.

12.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 ("Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений"), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.