"МУК 4.1.3422-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовой концентрации (R*,R*)-(+/-)-N-[2-гидрокси-5-[1-гидрокси-2-[[2-(4-метоксифенил)-1-метилэтил]амино]этил]фенил] формамида фумарата(2:1)дигидрата (формотерола фумарат дигидрат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 21.02.2017)

1. Подготовлены коллективом авторов ФГБНУ "Научно-исследовательского института медицины труда" (Л.Г. Макеева - руководитель, Н.С. Горячев, Е.Н. Грицун, Н.Л. Полуэктова), ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (В.Г. Сенникова, В.Н. Малхожева, Л.С. Осипова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 21 февраля 2017 г.

4. Введены впервые.

Сборник методических указаний "Измерения концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 59) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и является обязательным при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.016-79 "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ" с изм. 1, ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" с изм. 1, ГОСТ Р 8.563-09 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений", ГОСТ Р ИСО 5725-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.2308-07 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и дополнениях к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 205-29/RA.RU.311787-2016/2016.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовой концентрации формотерола фумарата дигидрата в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,001 - 0,008 мг/м³.

Методические указания носят рекомендательный характер.

2.1. Физико-химические свойства

Формотерола фумарат дигидрат

(C₁₉H₂₄N₂O₄)₂ x C₄H₄O₄ x 2H₂O

Молекулярная масса: 876,90.

Регистрационный номер CAS: 43229-80-7.

Формотерола фумарат дигидрат - белый или желтоватый кристаллический порошок с температурой плавления 136 - 142 °C. Легко растворим в ледяной уксусной кислоте, растворим в метаноле, малорастворим в этаноле и изопропаноле, малорастворим в воде, практически нерастворим в ацетоне, этилацетате и диэтиловом эфире.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика

Формотерола фумарат дигидрат - высокоактивное адреномиметическое, бронходилатирующее средство, селективный агонист адренергических длительного действия, применяется ингаляционно в суточных дозах 0,0045 - 0,054 мг. Умеренно опасен при поступлении внутрь, обладает общетоксическим и неспецифическим антигистаминным действием. Основные побочные эффекты при передозировке: тремор, головная боль, бессонница, тошнота, рвота, тахикардия, гипокалиемия, гипергликемия.

Для формотерола фумарата дигидрата ПДК в воздухе рабочей зоны не устанавливается, в перечень ПДК формотерола фумарата дигидрат вносится с пометкой "++", 1-й класс опасности.

Контроль формотерола фумарата дигидрата в воздухе рабочей зоны следует проводить на уровне чувствительности метода не менее 0,001 мг/м³.

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации формотерола фумарата дигидрата метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

Измерение массовой концентрации формотерола фумарата дигидрата выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым спектрофотометрическим (УФ) детектированием. Метод основан на разделении формотерола фумарата дигидрата и других компонентов анализируемой смеси на хроматографической колонке, заполненной сорбентом, с последующей регистрацией формотерола фумарата дигидрата с помощью ультрафиолетового детектора. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации формотерола фумарата дигидрата.

Измерение проводят при длине волны 214 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое количество формотерола фумарата дигидрата в хроматографируемом объеме раствора пробы - 0,01 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации формотерола фумарата дигидрата в воздухе 0,001 мг/м³ (при отборе 2 000 дм³ воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления лекарственных форм на основе формотерола фумарата дигидрата. Измерению не мешает вспомогательное вещество - лактоза моногидрат.

5.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства и материалы

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88 с изменением N 1.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТу 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТу 12.4.009-83. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТу 12.0.004-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускается специалист, имеющий высшее образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедший обучение и владеющий техникой анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, освоивший метод анализа в процессе тренировки и уложившийся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной раствор формотерола фумарата дигидрата с массовой концентрацией 500 мкг/см³ готовят растворением (0,0500 +/- 0,0002) г формотерола фумарата дигидрата в смеси спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему) в мерной колбе вместимостью 100 см³.

Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в хорошо укупоренной таре, в холодильнике, в защищенном от света месте.

9.1.2. Рабочий раствор формотерола фумарата дигидрата N 1 с массовой концентрацией 50,0 мкг/см³ готовят разбавлением 5,0 см³ основного раствора формотерола фумарата смесью спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему) в мерной колбе вместимостью 50 см³.

Раствор устойчив в течение недели при хранении в хорошо укупоренной таре, в холодильнике, в защищенном от света месте.

9.1.3. Рабочий раствор формотерола фумарата дигидрата N 2 с массовой концентрацией 10,0 мкг/см³ готовят разбавлением 10,0 см³ рабочего раствора формотерола фумарата дигидрата N 1 смесью спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему) в мерной колбе вместимостью 50 см³.

Раствор устойчив в течение суток при хранении в хорошо укупоренной таре, в холодильнике, в защищенном от света месте.

9.1.4. Приготовление смеси для растворения: смесь спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему). В мерной колбе вместимостью 1 000 см³ смешивают 500 см³ спирта метилового и 500 см³ воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему).

Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.5. Приготовление буферного раствора с pH 3,0. В мерной колбе вместимостью 1 000 см³ растворяют 6,81 г калия фосфорнокислого однозамещенного в воде особо чистой, доводят объем водой особо чистой до метки и перемешивают. Устанавливают pH раствора равным 3,0 +/- 0,2 путем прибавления концентрированной о-фосфорной кислоты с потенциометрическим контролем.

Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.6. Приготовление подвижной фазы (элюента). В мерной колбе вместимостью 1 000 см³ смешивают 800 см³ буферного раствора с pH 3,0 и 200 см³ ацетонитрила. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют, используя ультразвуковую ванну в течение 15 минут.

Раствор устойчив при хранении в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в течение 7 суток.

9.2. Подготовка хроматографа

Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания формотерола фумарата дигидрата в хроматографируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной градуировки по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии согласно табл. 2.

Градуировочные растворы используют свежеприготовленные. Растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике, в защищенном от света месте.

На фильтры, помещенные в бюксы, наносят пипеткой вместимостью 1 см³ объемы рабочего раствора формотерола фумарата дигидрата N 1 с массовой концентрацией 50,0 мкг/см³ и рабочего раствора формотерола фумарата дигидрата N 2 с массовой концентрацией 10,0 мкг/см³ в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5,0 см³ приливают по 5,0 см³ смеси спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему) и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в мерные пробирки вместимостью 10 см³. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см³ смеси спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему) и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же пробирки и доводят объем до 10,0 см³ смесью спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему). Далее растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографические виалы.

Инжектируют в хроматограф по 0,05 см³ каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным методом абсолютной градуировки строят градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (приборные единицы) от содержания формотерола фумарата дигидрата в хроматографируемом объеме градуировочных растворов (мкг).

9.4. Условия хроматографирования градуировочных растворов и растворов анализируемых проб

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества по п. 9.3 (в начале, середине и в конце измерений) и анализируют в точном соответствии с прописью методики.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

где S_изм, S_гр - значение площади пика (приборные единицы) формотерола фумарата дигидрата в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;

К_гр - норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировочной характеристики, предусмотренной методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики прибор градуируют заново.

9.6. Отбор проб воздуха

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением N 1 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Одновременно отбирают две параллельные пробы.

Воздух аспирируют в течение 15 минут через фильтр, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации формотерола фумарата дигидрата на уровне 0,001 мг/м³ отбирают не менее 2 000 дм³ воздуха.

Отобранные пробы можно хранить в бюксах в течение суток в холодильнике, в защищенном от света месте.

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс, с помощью пипетки вместимостью 5 см³ приливают 5 см³ смеси спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему), периодически помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в мерную пробирку вместимостью 10 см³. Фильтр повторно обрабатывают 5 см³ смеси спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему), оставляют на 15 минут, периодически помешивая при этом стеклянной палочкой, затем тщательно отжимают и фильтр удаляют. Раствор сливают в ту же пробирку, объем раствора доводят до метки смесью спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему). Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу.

Инжектируют в хроматограф по 0,05 см³ раствора анализируемой пробы.

Хроматографический анализ растворов анализируемой пробы выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждого раствора анализируемой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы.

Количественное определение содержания формотерола фумарата дигидрата (в мкг) в хроматографируемом объеме раствора анализируемой пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в смеси спирта метилового и воды особо чистой в соотношении 1:1 (по объему) вспомогательных веществ, входящих в состав лекарственных форм формотерола фумарата дигидрата.

Массовую концентрацию формотерола фумарата дигидрата в воздухе рабочей зоны C, мг/м³, вычисляют по формуле:

где а - содержание вещества в хроматографируемом объеме раствора анализируемой пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

B - общий объем раствора анализируемой пробы, см³;

б - хроматографируемый объем раствора анализируемой пробы, см³;

V₂₀ - объем воздуха, отобранный для анализа (дм³) и приведенный к стандартным условиям (прилож. 1).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

где C₁, C₂ - результаты параллельных определений массовой концентрации формотерола фумарата дигидрата в воздухе, мг/м³;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики.

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м³;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация формотерола фумарата дигидрата менее 0,001 мг/м³ (более 0,008 мг/м³)".

13.1. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD_0,95 по формуле:

где C_ср1, C_ср2 - средние значения массовой концентрации формотерола фумарата дигидрата, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м³;

CD_0,95 - значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.4).

13.2. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-02, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения_, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Разработаны сотрудниками ООО "Алгама" (Сергеюк Н.П.) и АО "ВНЦ БАВ" (Голубева М.И., Крымова Л.И.).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре 293 К (20 °C) и атмосферном давление 101,33 кПа (760 мм рт. ст.):

V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, дм³;

P - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.