"МУК 4.1.2163-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Галоксифопа-Р-метила и Галоксифопа-Р в воде, Галоксифопа-Р в почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, корнеплодах сахарной, кормовой и столовой свеклы, семенах и масле льна, рапса, сои, подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 15.02.2007)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в воде Галоксифопа-Р-метила и Галоксифопа-Р в диапазоне 0,001 - 0,02 мг/куб. дм и Галоксифопа-Р в почве, клубнях картофеля в диапазоне 0,005 - 0,1 мг/кг, зеленой массе растений, корнеплодах сахарной, кормовой и столовой свеклы, семенах и масле льна, рапса, сои, подсолнечника в диапазоне 0,01 - 0,2 мг/кг.

Краткая характеристика препарата

Фирма-производитель: Дау АгроСаенсес.

Торговое название: Зеллек-супер.

Название действующего вещества по ИСО: Галоксифоп-Р-метил.

Название действующего вещества по ИЮПАК: Метиловый эфир П-2-[4-(3-хлор-5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 375,7.

Химически чистый метиловый эфир представляет собой светло-коричневую или почти бесцветную жидкость.

Давление насыщенного пара: 0,328 мПа (при 25 °С).

Температура кипения: свыше 280 °С.

Растворимость: в воде - 9,08 мг/л; в ацетоне, циклогексане, дихлорметане, этаноле, метаноле, толуоле, ксилоле - свыше 1000 г/л.

В биологических средах легко гидролизуется до соответствующей кислоты. Период полураспада в воде составляет 2 дня, в почве - менее одного дня, в растениях эфир разрушается до кислоты в течение 4 - 8 дней в зависимости от вида растений.

Название действующего вещества по ИСО: Галоксифоп-Р.

Название действующего вещества по ИЮПАК: П-2-[4-(3-хлор-5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовая кислота.

Структурная формула (не приводится).

В России установлены следующие гигиенические нормативы для Галаксифопа-Р-метила (по Галоксифопу-Р):

ДСД для человека - 0,0002 мг/кг/сут.;

ПДК в воде водоема - 0,001 мг/куб. дм;

ОДК в почве - 0,15 мг/кг;

МДУ (мг/кг): свекла сахарная, подсолнечник (семена), соя (семена) - 0,05 мг/кг; масло растительное, свекла кормовая - 0,05;

ВМДУ (мг/кг): картофель - 0,01 мг/кг.

Область применения препарата

Галоксифоп-Р - повсходовый гербицид системного действия из группы производных арилоксифеноксипропионовой кислоты. Он замедляет синтез жирных кислот за счет ингибирования ацетилКоА-карбоксилазы. Применяется против однолетних и многолетних злаковых вегетирующих сорняков в посевах двудольных культур.

Производится фирмой Дау АгроСаенсес в виде концентрата эмульсии с содержанием действующего вещества 104 г/л.

Зарегистрирован в России под торговым названием Зеллек-супер, КЭ (104 г/л к-ты) для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорняками в посевах рапса, сои, льна, подсолнечника, свеклы сахарной и кормовой, в посевах и посадках сосны и ели в питомниках. Норма расхода препарата от 0,5 до 1 л/га.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Метод основан на определении Галоксифопа-Р-метила (вода) и Галоксифопа-Р с помощью газожидкостной хроматографии с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов с использованием набивной или капиллярной колонки после экстракции органическим растворителем, очистки экстракта путем двукратного перераспределения вещества из кислой среды в щелочную и на концентрирующих патронах, бутилирования кислоты и очистки бутилированного продукта на колонке с силикагелем.

Идентификация Галоксифопа-Р-метила и Галоксифопа-Р проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г, ГОСТ 19491-74.

Колбы мерные на 25, 50, 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц на 10 куб. мм, ТУ 2.833.106.

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см, ГОСТ 20292-74.

Хроматограф газовый "Цвет-550" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов.

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Аналитический стандарт Галоксифопа-Р с содержанием 99,8% д.в. (фирма Дау АгроСаенсес).

Аналитический стандарт метилового эфира Галоксифопа-Р с содержанием д.в. 99,8% (фирма Дау АгроСаенсес).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, х.ч., ТУ 6-09-3513-86.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

н-Бутанол, х.ч., ГОСТ 6006-78, свежеперегнанный.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Гелий очищенный марки "А", ТУ 51-940-80.

Кислота серная концентрированная, ч., ГОСТ 4204-77.

Кислота серная - 4 н водный раствор.

Кислота соляная концентрированная, х.ч., ГОСТ 3118-77.

Метанол, ГОСТ 6995-77.

Насадки для колонки готовые: 5% ХЕ-60 на Интертоне-Супер, размер частиц 0,12 - 0,16 мм, Хемапол, Чехия.

3% OV-17 на Интертоне-Супер, размер частиц - 0,16 - 0,20 мм, Хемапол, Чехия.

Натрия гидроокись, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Натрия гидроокись - 20%-ный водный раствор.

Натрия бикарбонат, х.ч., ГОСТ 4201.

Натрия бикарбонат, 5%-ный водный раствор.

Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Натрия хлорида насыщенный водный раствор.

Патроны концентрирующие: Диапак Амин (0,6 г), фирма БиоХимМак, МГУ, ТУ 4215-002-05451931-94.

Силикагель Л 100/250 меш, Хемапол, Чехия.

Спирт этиловый ректифицированный, ТУ 6-09-1710-77.

Хлороформ, ГОСТ 20015-74.

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.

Стандартный раствор Галоксифопа-Р в этаноле - 1 мг/куб. см (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами Диапак).

Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Блок нагревательный, сухой с регулируемой температурой с пределом 100 °С, D Block, DB-3, фирма Techna (Cambridge) Limited, Великобритания.

Вакуумный насос масляный, тип ВН-461-М.

Ванна ультразвуковая "Серьга", ТУ 3.836.008.

Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные на 250 и 500 куб. см, ГОСТ 10054-75.

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, с водной баней.

Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 куб. см, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 1039-72.

Концентраторы грушевидные (конические) 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1, 100% метилсиликон, длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы Хьюлетт Паккард.

Колонки хроматографические для колоночной хроматографии стеклянные или пластиковые, длина 150 - 250 мм, диаметр 15 мм.

Колонка хроматографическая стеклянная для ГЖХ, длина 2 и 3 м, внутренний диаметр 3 мм.

Насос вакуумный диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.

Мельница лабораторная электрическая, ТУ 46-22-236-84, или аналогичная.

Стаканы стеклянные на 100 куб. см, ГОСТ 6236-72.

Бумага универсальная индикаторная, ТУ-6-091181-76.

Фильтры бумажные "красная лента", ТУ 6-09-1678-86.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7.1.1. Приготовление подкисленного ацетонитрила

1 куб. дм ацетонитрила наливают в колбу объемом 1,5 куб. дм. К ацетонитрилу пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до pH ~= 1.

7.1.2. Приготовление раствора для бутилирования

В мерную колбу объемом 100 куб. см наливают 50 куб. см предварительно перегнанного н-бутанола и осторожно приливают туда 2 куб. см концентрированной серной кислоты. Раствор перемешивают и доводят объем до метки бутанолом. Бутилирующую смесь хранят под тягой в течение одного месяца. Перед приготовлением раствора н-бутанол перегоняют.

7.1.3. Приготовление 4 н раствора серной кислоты

Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

В мерную колбу объемом 1 куб. дм наливают 500 куб. см и туда осторожно приливают 112 куб. см концентрированной серной кислоты. Внимание! Происходит разогревание жидкости! Раствор осторожно перемешивают и добавляют около 150 куб. см воды. Когда раствор остынет, его доводят водой до метки.

7.1.4. Приготовление 5%-ного раствора гидрокарбоната натрия

В стакан на 500 куб. см помещают 50 г гидрокарбоната натрия. Приливают около 200 куб. см воды и растворяют осадок, выдерживая стакан в ультразвуковой ванне и помешивая стеклянной палочкой. Раствор переливают в мерную колбу на 1 куб. дм. При необходимости процедуру повторяют. После полного растворения осадка раствор в колбе доводят водой до 1 куб. дм.

7.1.5. Приготовление 4%-ного раствора соляной кислоты в метаноле

В мерную колбу на 100 куб. см добавляют небольшое количество метанола, к нему аккуратно приливают 4 куб. см концентрированной соляной кислоты, после чего доводят раствор метанолом до метки.

7.1.6. Приготовление стандартных растворов

50 мг Галоксифопа-Р (аналитического стандарта) взвешивают в мерной колбе вместимостью 50 куб. см, растворяют навеску в этаноле и доводят объем до метки этанолом (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике не более 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 этанолом готовят стандартный раствор N 2 с концентрацией 10,0 мкг/куб. см, который может храниться в холодильнике не более 30 суток.

Таким же образом готовят стандартные растворы метилового эфира Галоксифопа-Р для анализа воды, растворяя его в гексане.

7.1.7. Приготовление охлаждающей смеси

33 г хлорида натрия растворяют в 100 куб. см воды, в раствор добавляют лед до насыщения.

7.1.8. Приготовление 20%-ного водного раствора гидроокиси натрия

В стакане объемом 1 куб. дм взвешивают 200 г гидроокиси натрия, приливают 500 куб. см воды и растворяют осадок при постоянном помешивании. После охлаждения до комнатной температуры раствор переносят в мерную колбу объемом 1 куб. дм и доводят объем раствора водой до метки.

7.1.9. Приготовление 5%-ного водного раствора бикарбоната натрия

В стакане объемом 400 куб. см взвешивают 50 г бикарбоната натрия, приливают 200 куб. см воды и растворяют осадок при постоянном помешивании. После охлаждения до комнатной температуры раствор переносят в мерную колбу объемом 1 куб. дм и доводят объем раствора водой до метки.

7.2.1. Кондиционирование патронов. Патроны промывают 10 куб. см ацетона.

7.2.2. Проверка хроматографического поведения Галоксифопа-Р на патронах Диапак Амин

В концентратор вносят 1 куб. см стандартного раствора Галоксифопа-Р в этаноле с концентрацией 1 мкг/куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С. Добавляют в концентратор 10 куб. см ацетона, обмывают стенки концентратора, наносят на патрон и пропускают со скоростью не более 2 куб. см/мин., не допуская высыхания поверхности патрона. Смыв отбрасывают. Промывают патрон еще одной порцией ацетона 10 куб. см, смыв отбрасывают.

Элюируют Галоксифоп-Р, пропуская через патрон 3 - 4 порции 4%-ной соляной кислоты в метаноле по 5 куб. см каждая и собирая их в отдельные концентраторы емкостью 100 куб. см. Собранные фракции выпаривают досуха. Сухой остаток в концентраторах переносят в виалу тремя порциями эфира по 3 куб. см и отдувают в токе теплого воздуха.

После этого проводят бутилирование, как указано в п. 7.5. Из верхнего гексанового слоя отбирают аликвоту 1 куб. мм и вводят в капиллярный хроматограф. После введения всех проб в хроматограф рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смыва с патрона и необходимый объем элюата.

7.3.1. Подготовка и кондиционирование колонки с силикагелем

В стеклянную или пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату и заполняют ее 3,5 г силикагеля Л 100/250 меш, уплотняя путем вибрации колонки. На слой силикагеля наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. За день до определения промывают заполненную колонку 40 см 8%-ного раствора этилацетата в н-гексане со скоростью 2 - 3 капли в секунду. После этого колонка готова к работе.

7.3.2. Проверка хроматографического поведения бутилового эфира Галоксифопа-Р

В подготовленную колонку вносят 4 куб. см стандартного раствора бутилового эфира Галоксифопа-Р с концентрацией 1 мкг/куб. см (раствор N 3, раздел 7.5). Промывают колонку 10 куб. см н-гексана со скоростью 2 - 3 капли в секунду, не допуская осушения верхнего края адсорбента. После этого последовательно пропускают через колонку 5 - 6 порций 8%-ного раствора этилацетата в н-гексане по 5 куб. см каждая, собирая их в отдельные емкости. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 - 2 куб. см н-гексана и вводят в хроматограф с насадочной колонкой 5 куб. мм пробы или 1 куб. мм с капиллярной колонкой. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюата.

Примечание: Хроматографическое поведение Галоксифопа-Р на колонке обязательно проверяют при отработке методики и каждый раз при использовании навой партии силикагеля.

Готовую насадку (5% ХЕ-60 или 3% OV-17 на Интертоне-Супер) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 240 °С или 280 °С в течение 8 - 10 часов.

Для приготовления градуировочных растворов отбирают 1 куб. см стандартного раствора N 2 (концентрация - 10 мкг/куб. см) в виалу и удаляют растворитель током теплого воздуха. К сухому остатку в виале добавляют 1 куб. см 2%-ного раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле. Плотно закрывают виалу крышкой и помещают в блок для виал, нагретый до 100 °С. Бутилирование проводят в течение 30 минут. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры и добавляют в нее 10 куб. см гексана и 20 - 25 куб. см дистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают и выстаивают до полного разделения фаз. Верхний гексановый слой используют для приготовления стандартных растворов, которые применяют при построении градуировочного графика. Концентрация Галоксифопа-Р в гексановом растворе составляет 1,0 мкг/куб. см (раствор N 3).

Методом последовательного разбавления раствора Галоксифопа-Р N 3 гексаном в мерных колбах готовят рабочие растворы с концентрациями: 0,01; 0,02; 0,05; 0,1 мкг/куб. см, которые могут храниться в холодильнике не более 10 сут.

Из раствора Галоксифопа-Р-метила с концентрацией 10 мкг/куб. см (раздел 7.1.6) готовят последовательным разбавлением гексаном в мерных колбах стандартные растворы с концентрациями: 0,1; 0,05; 0,025; 0,01 и 0,005 мкг/куб. см.

7.7.1. Галоксифоп-Р. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Галоксифопа-Р в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05; 0,1 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм (капиллярная колонка) или 5 куб. мм (набивная колонка) каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.8. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Галоксифопа-Р в растворе в мкг/куб. см.

7.7.2. Галоксифоп-Р-метил. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Галоксифопа-Р-метила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,1; 0,05; 0,025; 0,01 и 0,005 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм (капиллярная колонка) или 5 куб. мм (набивная колонка) каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.8. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Галоксифопа-Р-метила в растворе в мкг/куб. см.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 26766-85, 1722-85 "Свекла столовая свежая. ТУ", ГОСТ 28736-90 "Корнеплоды кормовые", ГОСТ 7176-85 "Картофель свежий продовольственный заготовляемый и поставляемый. ТУ", ГОСТ 27978-88 "Корма зеленые. ТУ", ГОСТ 22391-89 "Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках", ГОСТ 1129-93 "Масло подсолнечника. ТУ", ГОСТ 7825-96 "Масло соевое. ТУ", ГОСТ 8988-77 "Масло рапсовое. ТУ", ГОСТ 5791-81 "Масло льняное техническое. ТУ", ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правило приемки и методы отбора проб".

Отобранные пробы воды, сырой почвы и продукции с высокой влажностью хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше +4 °С не более 3-х суток.

Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года.

Для длительного хранения растительные образцы замораживаются и хранятся в холодильнике при -18 °С до 2-х лет.

Семена масличных культур, подсушенные до стандартной влажности, хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6-ти месяцев. Влажные семена замораживают и хранят в морозильной камере при -14 °С до 1 года.

Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 10 суток.

Перед анализом аналитическую пробу воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 0,1 мм, свежие клубни картофеля и корнеплоды свеклы растирают на терке, семена измельчают на мельнице, растительный материал режут ножом на кусочки длиной не более 0,5 см.

9.1.1. Экстракция и очистка экстракта

Из средней пробы воды отбирают 50 куб. см, помещают в делительную воронку, подщелачивают 5%-ным раствором бикарбоната натрия до pH 8 - 9, добавляют 20 куб. см н-гексана и встряхивают 2 минуты. После разделения слоев верхнюю водную фазу сливают в стакан, а гексан собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фазу возвращают в воронку и экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 10 куб. см гексана. Гексановые фракции объединяют в концентраторе и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Водную фазу возвращают в воронку.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 куб. см гексана. Для определения концентрации метилового эфира Галоксифопа-Р вводят 5 куб. мм пробы (набивная колонка) или 1 куб. мм (капиллярная колонка) в хроматограф.

Оставшуюся в делительной воронке водную фазу подкисляют 4 н серной кислотой до pH 2 - 3. Прибавляют в воронку 20 куб. см диэтилового эфира, встряхивают воронку 2 мин. и после расслоения фаз сливают эфирный слой в отдельную посуду. Эфирную фракцию возвращают в воронку и повторяют экстракцию еще два раза по 10 куб. см эфира каждый раз, водную фазу отбрасывают.

Эфирные экстракты объединяют и переносят в чистую делительную воронку объемом 250 куб. см. В воронку прибавляют 20 куб. см 5%-ного водного раствора бикарбоната натрия (pH раствора должна быть 8 - 9), встряхивают содержимое в течение 2 мин. После разделения слоев водную фазу переносят в химический стакан объемом 100 куб. см, а эфирную фракцию отбрасывают. В стакан осторожно добавляют 4 н серную кислоту до pH 2 - 3. Жидкость перемешивают стеклянной палочкой до полного прекращения выделения пузырьков углекислого газа.

Раствор из стакана переносят в делительную воронку на 250 куб. см, обмывая стакан 20 куб. см эфира, и встряхивают воронку 2 минуты. После разделения фаз водную фазу переносят в химический стакан объемом 100 куб. см, а эфирный слой переносят в конический концентратор, пропуская его через безводный сернокислый натрий. Повторяют экстракцию дважды порциями эфира по 10 куб. см. Эфирные экстракты объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С (последние капли удаляют в токе теплого воздуха). Водную фракцию отбрасывают.

9.1.2. Бутилирование

К сухому остатку в виале добавляют 1 куб. см 2%-ного раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле. Плотно (!) закрывают виалу пробкой и нагревают в сухом блоке при 100 °С в течение 30 минут. По прохождении времени виалу охлаждают при комнатной температуре. После охлаждения добавляют в виалу 5 куб. см гексана и 25 куб. см дистиллированной воды, встряхивают 3 минуты. После разделения слоев вводят в хроматограф 5 куб. мм гексановой фракции (набивная колонка) или 1 куб. мм (капиллярная колонка).

9.2.1. Экстракция

Навеску, соответствующую 25 г воздушно-сухой почвы, помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, равномерно смачивают 10 куб. см 20%-ного водного раствора едкого натра, перемешивают и выдерживают 20 мин.

Добавляют в колбу 50 куб. см этанола, встряхивают на приборе для встряхивания в течение часа и оставляют на ночь (влажную почву гомогенизируют предварительно с этанолом в течение 2 мин. на гомогенизаторе при 5000 об./мин.). После выдерживания в течение ночи экстракт отфильтровывают методом декантации через фильтр "синяя лента". Повторяют экстракцию с 40 куб. см этанола в течение 1 часа, экстракты объединяют. При анализе почв с содержанием гумуса более 2,5% в качестве экстрагента используют ацетон.

9.2.2. Предварительная очистка экстракта

Отбирают 20 куб. см раствора из объединенного экстракта и помещают в делительную воронку на 250 куб. см. Добавляют 25 мл дистиллированной воды, 10 куб. см насыщенного раствора NaCl и при перемешивании подкисляют раствор 4 н серной кислотой до pH 2 - 3 по универсальному индикатору.

Прибавляют в воронку 20 куб. см диэтилового эфира, встряхивают воронку 2 мин. и после расслоения фаз водную фазу переносят в химический стакан объемом 100 куб. см и сливают эфирный слой в отдельную посуду. Повторяют экстракцию еще два раза по 10 куб. см эфира каждый раз, водную фазу отбрасывают.

Эфирные экстракты объединяют и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. В воронку прибавляют 20 куб. см 5%-ного водного раствора бикарбоната натрия (pH раствора должна быть 8 - 9), встряхивают содержимое в течение 2 мин. После разделения слоев жидкости эфирную фракцию отбрасывают, а водную фазу переносят в химический стакан объемом 100 куб. см. В стакан осторожно добавляют 4 н серную кислоту до pH 2 - 3. Жидкость перемешивают стеклянной палочкой до полного прекращения выделения пузырьков углекислого газа.

Раствор переносят в делительную воронку на 250 куб. см, обмывая стакан 20 куб. см эфира, и встряхивают воронку 2 минуты. После разделения фаз эфирный слой переносят в концентратор, пропуская его через безводный сернокислый натрий. Повторяют экстракцию дважды порциями эфира по 10 куб. см. Эфирные экстракты объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, последние капли удаляют в токе теплого воздуха.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 3 куб. см эфира и эфирную фракцию переносят в виалу для бутилирования. Концентратор обмывают еще двумя порциями эфира и эфирные фракции объединяют в виале. Объединенный эфирный раствор в виале выпаривают в токе теплого воздуха или азота досуха.

9.2.3. Бутилирование

К сухому остатку в виале добавляют 1 куб. см 2% раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле. Плотно (!) закрывают виалу пробкой и нагревают в сухом блоке при 100 °С в течение 30 минут. По прохождении времени виалу охлаждают при комнатной температуре. После охлаждения добавляют в виалу 5 куб. см гексана и 25 куб. см дистиллированной воды, встряхивают 3 минуты. После разделения фаз 4 куб. см гексановой фракции (верхней) осторожно отбирают пипеткой и переносят на колонку с силикагелем для очистки.

9.2.4. Очистка бутилированного экстракта

В подготовленную по пункту 7.3.1 колонку вносят 4 куб. см гексанового экстракта. Прибавляют последовательно 10 куб. см гексана и 5 куб. см 8%-ного раствора этилацетата в н-гексане, элюируют их из колонки со скоростью 2 - 3 капли в секунду. Элюат отбрасывают. Затем пробу элюируют 20 куб. см 8%-ного раствора этилацетата в н-гексане. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха. Остаток растворяют в 2 куб. см гексана и вводят в хроматограф 5 куб. мм образца (набивная колонка) или 1 куб. мм (капиллярная колонка).

9.3.1. Экстракция и очистка экстракта

Из растертого на терке среднего образца клубней картофеля или корнеплодов свеклы взвешивают аналитическую пробу 10 г в конической колбе объемом 250 куб. см. Прибавляют в колбу 50 куб. см водноспиртового раствора гидроксида натрия. Закрывают колбу пробкой и встряхивают ее в течение 2 час. Экстракт фильтруют методом декантации через плотный фильтр "синяя лента" (или центрифугируют) и добавляют к навеске еще одну 50 куб. см порцию водноспиртового раствора гидроксида натрия. Встряхивают образец 30 минут, экстракт фильтруют и объединяют с предыдущим.

Далее поступают, как указано в разделах 9.2.2; 9.2.3 и 9.2.4 (почва).

К навеске 10 г измельченной зеленой массы добавляют 50 куб. см водноспиртового раствора щелочи, встряхивают 1 час, затем отфильтровывают в колбу через плотный фильтр (синяя лента) методом декантации, не перенося массу на фильтр. Навеску еще раз заливают 50 куб. см водноспиртового раствора щелочи, встряхивают 1 час и отфильтровывают в ту же колбу. Экстракты объединяют и далее анализируют экстракт, как указано в разделах 9.2.2; 9.2.3 и 9.2.4 (почва).

Навеску 10 г измельченных семян помещают в колбу объемом 250 куб. см, приливают 50 куб. см водноспиртового раствора щелочи, встряхивают 2 часа и оставляют на ночь. На следующий день встряхивают колбу еще 1 час и экстракт фильтруют, осторожно отжимая стеклянной палочкой, через плотный (!) фильтр (синяя лента).

Переносят 10 куб. см экстракта в колбу объемом 100 куб. см, добавляют 25 куб. см дистиллированной воды, 10 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и доводят pH раствора до 9, добавляя 25 - 30 куб. см 5%-ного раствора бикарбоната натрия. Колбу помещают в ледяную баню с температурой -6 - 8 °С на 15 - 20 минут. После охлаждения раствор фильтруют в чистую делительную воронку через плотный фильтр и подкисляют 4 н серной кислотой до pH 2 - 3. Далее анализируют экстракт, как указано в разделах 9.2.2; 9.2.3 и 9.2.4 (почва).

Навеску 10 г измельченных семян или масла помещают в колбу объемом 250 куб. см, приливают 50 куб. см водноспиртового раствора щелочи, встряхивают 1 час и оставляют на ночь. Затем встряхивают колбу еще 1 час и экстракт фильтруют через плотный фильтр "синяя лента".

Экстракт из масла переносят в делительную воронку и нижний водный слой сливают в стакан объемом 100 куб. см.

Отбирают 10 куб. см экстракта в делительную воронку, добавляют 25 куб. см дистиллированной воды, 10 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и доводят pH раствора до 8 - 9 прибавлением 5%-ного раствора бикарбоната натрия. Прибавляют 20 куб. см н-гексана и встряхивают воронку 2 минуты. После разделения фаз гексановый слой отбрасывают. Повторяют очистку экстракта н-гексаном еще дважды по 20 куб. см, отбрасывая гексановую фракцию.

Переносят водную фазу в колбу емкостью 100 куб. см, ополаскивая посуду раствором бикарбоната натрия, и колбу помещают в ледяную баню с температурой -6 - 8 °С на 15 - 20 минут. После охлаждения раствор фильтруют в чистую делительную воронку через плотный фильтр и подкисляют 4 н серной кислотой до pH 2. Далее анализируют экстракт, как указано в разделах 9.2.2; 9.2.3 и 9.2.4 (почва).

Примечание: При анализе семян льна бутиловый эфир элюируют из колонки 30 куб. см 8%-ного раствора этилацетата в гексане вместо указанных 20 куб. см.

9.6.1. Экстракция

Навеску измельченных семян рапса 10 г помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе в течение 45 минут. По окончании встряхивания экстракт фильтруют в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см подкисленного ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту 10 куб. см и выпаривают ее на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до капель масла.

9.6.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Остаток в концентраторе, полученный по разделу 9.6.1, разводят в 5 куб. см ацетона, ополаскивают стенки концентратора, добавляют 50 куб. см 5%-ного раствора гидрокарбоната натрия и переносят водную фазу в делительную воронку.

Добавляют в воронку 5 г хлористого натрия и 20 куб. см гексана, интенсивно встряхивают смесь в течение 1 - 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний гексановый отбрасывают. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Очистку повторяют еще дважды, используя для этого каждый раз 20 куб. см гексана.

Водную фракцию переносят в ту же делительную воронку, подкисляют 4 н серной кислотой до pH = 1, дегазируют, добавляют 30 куб. см эфира и интенсивно встряхивают смесь в течение 1 - 2 мин.

После разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан, а верхний эфирный собирают в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза тем же объемом эфира. Объединенный экстракт выпаривают при температуре не выше 35 °С досуха. Водную фракцию отбрасывают.

9.6.3. Очистка экстракта на патроне Диапак Амин

Сухой остаток в концентраторе, полученный по разделу 9.6.2, растворяют в 10 куб. см ацетона и наносят на подготовленный патрон (раздел 7.2.1). Патрон промывают 10 куб. см ацетона, элюат отбрасывают. Далее элюируют Галоксифоп-Р 10 куб. см 4%-ной соляной кислоты в метаноле, собирая элюент в концентратор, и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха. Сухой остаток в концентраторе переносят в виалу тремя порциями эфира по 3 куб. см и отдувают в токе теплого воздуха.

9.6.4. Бутилирование

К сухому остатку в виале добавляют 1 куб. см 2%-ного раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле. Плотно закрывают виалу крышкой и помещают в блок для виал, нагретый до 100 °С. Бутилирование проводят в течение 30 минут. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры и добавляют в виалу 10 куб. см гексана и 20 - 25 куб. см дистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают и после разделения фаз из верхнего гексанового слоя аликвоту 1 куб. мм вводят в хроматограф.

Навеску масла 10 г растворяют в 100 куб. см гексана и переносят в делительную воронку. Добавляют в делительную воронку 100 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 2 минут. После полного разделения слоев нижний (ацетонитрильный) слой собирают в концентратор 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 60 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 2 минуты. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту 1/2 части и выпаривают ее на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до капель масла.

Далее проводят анализ, как указано в разделах 9.6.2; 9.6.3 и 9.6.4.

Колонка стеклянная спиральная, длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм. Носитель - Интертон-Супер 80 - 100 меш, неподвижная фаза - 5% ХЕ-60.

Температура термостата колонки - 210 °С, детектора - 300 °С, испарителя - 250 °С.

Скорость газа-носителя - 30 куб. см/мин.

Объем пробы, вводимый в испаритель, - 5 куб. мм. Абсолютное время удержания бутилового эфира Галоксифопа-Р - 3 мин. 50 сек. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,025 - 0,5 нг.

Альтернативная фаза: 3% OV-17 на Интертоне. Длина колонки 3 метра.

Температура термостата колонки - 250 °С, детектора - 340 °С, испарителя - 270 °С.

Абсолютное время удерживания бутилового эфира Галоксифопа-Р - 2 мин. 58 сек.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/куб. см, разбавляют.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1, Methyl Siloxane, длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 320 °С, испарителя - 260 °С, колонки - 220 °С.

Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, режим нормальный, скорость 20 см/с, давление 101,8 кПа.

Газ 2 (гелий) - 30 куб. см/мин.: расход 0,5 куб. см/мин., сброс 1:60.

Газ 3 (азот, поддув детектора) - 45 куб. см/мин.

Абсолютное время удерживания Галоксифопа-Р - 9 мин. 38 сек.

Линейность детектирования сохраняется в пределах - 0,01 - 0,1 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Галоксифопа-Р 0,1 мкг/куб. см соответственно, разбавляют.

Количественное определение Галоксифопа-Р проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов Галоксифопа-Р с концентрацией 0,005 - 0,1 мкг/куб. см.

Содержание Галоксифопа-Р-метила и Галоксифопа-Р в воде, Галоксифопа-Р в почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, корнеплодах сахарной, кормовой, столовой свеклы, семенах и масле льна, рапса, сои, подсолнечника рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".