"ГОСТ 18663-78. Государственный стандарт Союза ССР. Витамин B12 кормовой. Технические условия"
(введен Постановлением Госстандарта СССР от 21.11.1978 N 3062)
(ред. от 20.07.1984)

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 21 ноября 1978 г. N 3062 срок действия установлен

Переиздание. Январь 1980 г.

Настоящий стандарт распространяется на кормовой витамин , получаемый сбраживанием барды ацетоно-бутилового производства метанобразующими бактериями с последующим концентрированием путем выпаривания и сушки.

Кормовой витамин предназначен для витаминизации кормов, используемых в животноводстве и птицеводстве.

1.1. Кормовой витамин должен изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическому регламенту с соблюдением санитарных норм и правил, утвержденных в установленном порядке.

1.2. Для производства кормового витамина должны применяться следующие сырье и вспомогательные материалы:

барда ацетоно-бутилового производства с массовой долей сухих веществ 1,4 - 2,5% и с pH, равным 4,0 - 6,0;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

кобальт хлористый по ГОСТ 4525-77 или

кобальт азотнокислый по ГОСТ 4528-78;

метанол-яд синтетический по ГОСТ 2222-78;

карбамид по ГОСТ 2081-75 или мочевина по ГОСТ 6691-77;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

дрожжи кормовые по ГОСТ 20083-74;

кислота соляная синтетическая техническая по ГОСТ 857-78 или

кислота соляная техническая или

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

кислота ортофосфорная термическая по ГОСТ 10678-76;

кислота олеиновая по ГОСТ 10475-75 или

жир кашалотовый по ГОСТ 8714-72 или

соапсток из саломаса и животных жиров, из светлых масел и жиров, кроме соапстока из масел арахисового, хлопкового, соапсового и маргаринового;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

жир животный технический по ГОСТ 1045-73 или жир животный кормовой по ГОСТ 17483-72 или жиры морских млекопитающих и рыб технические по ГОСТ 1304-76 или пропинол Б-400 технический;

(введено Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

меласса;

(введено Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

диаммонийфосфат кормовой по ГОСТ 19651-74;

(введено Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

сульфит натрия кристаллический по ГОСТ 903-76 или

гидросульфит натрия технический по ГОСТ 246-76 или

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

пиросульфит натрия технический по ГОСТ 11683-76 или сульфит натрия безводный по ГОСТ 5644-75.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

1.3. В зависимости от содержания витамина препарат кормового витамина подразделяют на марки А, Б.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

1.4. По органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям кормовой витамин должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице.

(таблица в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

2.1. Кормовой витамин принимают партиями. Партией считают любое количество однородного по органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям кормового витамина , фасованное и упакованное в однородную тару и оформленное одним документом о качестве.

2.2. В документе о качестве должны быть указаны:

наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак;

наименование препарата;

номер партии;

масса нетто партии;

дата изготовления препарата;

номер документа о качестве;

дата выдачи документа о качестве;

количество мест в партии;

результаты анализа;

штамп ОТК;

обозначение настоящего стандарта.

2.3. Для проверки качества кормового витамина от каждой партии до 100 единиц продукции делают выборку в количестве 10%, но не менее четырех упаковочных единиц. Если в партии более 100 единиц продукции, отбирают 5% упаковочных единиц. Выборку составляют из единиц продукции, отобранных из разных мест партии.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

2.4. При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве выборки, взятой от той же партии кормового витамина . Результаты повторных испытаний распространяются на всю партию.

2.5. Изготовитель определяет число микробных клеток и безвредность в каждой десятой партии препарата.

(п. 2.5 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.1. Методы отбора проб

Отбор проб - по ГОСТ 13496.0-80. Масса объединенной пробы должна быть не менее 300 г.

(п. 3.1.1 в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.1.2. Исключен с 1 января 1985 года. - Изменение N 1, введенное Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565.

3.1.3. Исключен с 1 января 1985 года. - Изменение N 1, введенное Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565.

3.2. Внешний вид и цвет кормового витамина определяют визуально в каждой единице продукции в момент отбора точечной пробы.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.3. Определение запаха

3.3.1. Навеску массой 20 г высыпают на чистую бумагу и органолептически определяют запах. Для усиления ощущения запаха навеску помещают в фарфоровую чашку, которую накрывают стеклом, ставят на предварительно нагретую до кипения водяную баню (или сосуд с водой) и прогревают в течение 5 мин.

3.4. Определение массовой доли влаги кормового витамина - по ГОСТ 13496.3-80.

(п. 3.4 в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.4.1. Исключен с 1 января 1985 года. - Изменение N 1, введенное Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565.

3.4.2. Исключен с 1 января 1985 года. - Изменение N 1, введенное Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565.

3.4.3. Исключен с 1 января 1985 года. - Изменение N 1, введенное Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565.

3.5. Определение содержания витамина микробиологическим методом с использованием в качестве тест-микроба E. coli штамм 113-3

Метод основан на способности культуры E. coli штамм 113-3 расти только в присутствии витамина .

Примечание. При разногласиях между поставщиками и потребителем и при поставке продукции на экспорт определение массовой доли витамина проводят с использованием цианистого калия.

(примечание введено Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.1. Аппаратура, реактивы и материалы

Для проведения испытания применяют:

весы технические I, II классов типов Т-1, Т-2;

весы аналитические с разновесами марки АДВ-200 или других аналогичных марок;

холодильник стеклянный лабораторный по ГОСТ 9499-70;

плитку электрическую по ГОСТ 306-76;

термостат;

автоклав;

pH-метр или бумагу индикаторную универсальную pH 1 - 10;

фотоэлектроколориметр или нефелометр;

баню водяную;

колбы мерные по ГОСТ 1770-74 вместимостью 50, 100 и 1000, 500 и 250 см3;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82 вместимостью 100 см3;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

пробирки биологические длиной не менее 180 мм по ГОСТ 25336-82;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

пипетки по ГОСТ 20292-74 вместимостью 2 - 5 и 10 см3;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

петлю микробиологическую;

воронку Бюхнера по ГОСТ 9147-80;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

воронку стеклянную по ГОСТ 25336-82;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

калий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 2493-75;

железо сернокислое закисное по ГОСТ 4148-78;

магний сернокислый по ГОСТ 4523-77;

глицерин по ГОСТ 6259-75;

агар микробиологический по ГОСТ 17206-71 или агар пищевой по ГОСТ 16280-70;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

воду бидистиллированную по ГОСТ 6709-72;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

l-аспарагин;

цианокобаламин (витамин ) по Государственной фармакопее, изд. X, ст. 192 или раствор цианокобаламина для инъекций по Государственной фармакопее, изд. X, ст. 193;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

кислоту соляную по ГОСТ 3118-77, 1 н., 20%-ный раствор;

натрия гидрат окиси (натр едкий) по ГОСТ 4328-77, 0,2; 0,5 и 1,5 н. растворы;

казеин технический по ГОСТ 17626-81 или гидролизат казеина;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

уголь активированный марки "Бау" по ГОСТ 6217-74;

толуол по ГОСТ 5789-78;

калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198-75;

натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280-76;

аммоний сернокислый по ГОСТ 3769-78;

глюкозу по ГОСТ 6038-79;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

натрий азотнокислый по ГОСТ 4197-74 или калий цианистый технический по ГОСТ 8465-79;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

dl-метионин;

бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026-76;

спектрофотометр СФ-26 или других аналогичных марок.

(абзац введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.2. Подготовка к испытанию

3.5.2.1. Приготовление 10%-ного казеинового кислотного гидролизата

100 г размолотого казеина, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 1000 см3, добавляют 500 см3 20%-ной соляной кислоты и перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и нагревают в течение 24 ч. Первые 5 - 8 ч нагревание проводят на водяной бане при температуре 100 °C, а затем на плитке с асбестовой сеткой.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Из полученного гидролизата под вакуумом отгоняют соляную кислоту до получения густого сиропа. Затем добавляют 300 см3 бидистиллированной воды и снова отгоняют до получения густого сиропа. Указанную операцию повторяют еще раз.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Оставшуюся массу растворяют в 100 см3 бидистиллированной воды, доводят pH до 3,5 5 н. раствором едкого натра, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и доливают до метки бидистиллированной водой.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Добавляют 20 см3 активированного угля и периодически встряхивают в течение 1 ч, затем полученную смесь фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтрат еще раз обрабатывают углем до получения бесцветного или слабо-желтого раствора, который разливают в колбы вместимостью до 100 см3 и стерилизуют в автоклаве при 1 кгс/см2 в течение 20 мин и затем охлаждают. Раствор хранят в холодильнике под слоем толуола.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.2.2. Выращивание чистой культуры E. coli штамм 113-3

Культуру выращивают в пробирках на агаровых косяках и хранят в холодильнике при температуре 3 - 5 °C.

Состав агаровой среды в расчете на 100 см3:

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

казеиновый кислотный 10%-ный гидролизат - 6 см3;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

калий фосфорнокислый двузамещенный - 20 мг;

железо сернокислое - 0,5 мг;

магний сернокислый - 20 мг;

l-аспарагин - 20 мг;

глицерин - 200 мг;

агар - 1,5 г;

витамин - 10 мкг;

вода бидистиллированная - до 100 см3.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

В колбу вместимостью 100 см3 наливают бидистиллированную воду и последовательно растворяют в ней первые четыре компонента.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

l-аспарагин отдельно растворяют в бидистиллированной воде с прибавлением нескольких капель 1 н. соляной кислоты, а затем приливают к раствору в колбе. 1 н. раствором едкого натра доводят pH раствора до 7,0. Избыток щелочи нейтрализуют 1 н. раствором соляной кислоты.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

К раствору добавляют глицерин, агар и доливают бидистиллированной водой до метки. Затем колбу с содержимым подогревают на водяной бане до растворения агара, вносят витамин и смесь тщательно перемешивают. Смесь разливают по 5 см3 в пробирки и стерилизуют 15 мин под давлением 1 кгс/см2.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Культуру раз в месяц пересевают на свежую агаровую среду и выдерживают в термостате в течение 24 ч при температуре 37 °C.

3.5.2.3. Приготовление основной среды

Состав среды в расчете на 1000 см3:

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

калий фосфорнокислый двузамещенный - 7 г;

калий фосфорнокислый однозамещенный - 3 г;

натрий лимоннокислый - 0,5 г;

магний сернокислый - 0,1 г;

аммоний сернокислый - 1 г;

глюкоза - 2 г;

натрий хлористый - 0,5 г;

натрий азотистокислый - 0,5 г или калий цианистый - 0,02%-ный раствор - 5 см3;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

вода бидистиллированная - до 1000 см3.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

В колбу вместимостью 1000 см3 наливают бидистиллированную воду и последовательно растворяют в ней все компоненты. Затем доводят содержимое колбы бидистиллированной водой до метки. Конечное значение pH среды устанавливают 6,8 - 7,0.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.2.4. Приготовление посевной культуры

Посевную культуру готовят за сутки до постановки опыта. Для этого пробирки с 10 см3 основной среды и витамином (из расчета 0,025 мкг в 1 см3 среды) или dl-метионином (из расчета 1 мкг в 1 см3 среды) стерилизуют в автоклаве при 1 кгс/см2 в течение 20 мин и после охлаждения петлей вносят культуру с агаровой среды.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Пробирки выдерживают в термостате 16 - 20 ч при температуре 37 °C. Полученную бактериальную суспензию разводят стерильным 0,9%-ным раствором хлористого натрия или стерильной основной средой, разбавленной вдвое стерильной бидистиллированной водой в соотношении одна капля суспензии на 10 см3 раствора или среды.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.2.5. Приготовление разведений стандартного раствора витамина 

Перед приготовлением стандартного раствора витамина определяют его содержание в кристаллическом цианкобаламине или в его растворе на спектрофотометре.

Для этого около 0,1 г кристаллического цианкобаламина, взвешенного с погрешностью не более 0,0001 г, растворяют в бидистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 см3 и доводят объем раствора до метки.

25 см3 полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и доводят объем раствора бидистиллированной водой до метки. Оптическую плотность определяют на спектрофотометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

Массовую долю цианкобаламина (X) в процентах вычисляют по формуле

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

207 - удельный показатель поглощения чистого безводного цианкобаламина при длине волны 361 нм;

m - масса навески, г.

Раствор цианкобаламина из ампулы разводят бидистиллированной водой до содержания около 0,02 мг цианкобаламина в 1 см3, измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве контрольного раствора применяют бидистиллированную воду. Содержание цианкобаламина в мг в см3 вычисляют по формуле

где - конечный объем раствора, см3;

V - объем раствора цианкобаламина, взятый для разведения, см3.

(абзац введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Стандартный раствор готовят из расчета 10 мкг витамина на 1 см3 бидистиллированной воды.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Раствор хранят в холодильнике в темной стеклянной посуде с притертой пробкой под слоем толуола в течение месяца. По истечении срока хранения раствор подлежит проверке на спектрофотометре по методике для раствора цианкобаламина.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

В день опыта раствор разводят в (последовательно в 100, 100, а затем в 20 раз). Затем из этого разведения готовят четыре рабочих разведения и одно контрольное. Каждое из них готовят в трех повторностях, для чего в 15 пробирок (по три для каждого разведения и контроля) пипеткой вносят по 5 см3 основной среды и следующие количества раствора витамина : 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 см3. Затем объем содержимого каждой пробирки доводят до 10 см3 добавлением бидистиллированной воды.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.2.6. Подготовка исследуемой пробы кормового витамина для анализа

Навеску препарата массой 1 г, взвешенную с погрешностью не более 0,0001 г, измельчают и суспензируют в 50 см3 бидистиллированной воды. Для стабилизации добавляют 0,05 - 0,10 г азотистокислого натрия или 1 - 2 см3 0,02%-ного раствора цианистого калия и несколькими каплями 1 н. соляной кислоты доводят pH суспензии до 5,0 - 5,5. Избыток кислоты нейтрализуют 0,5 н. раствором едкого натра.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Затем суспензию кипятят в течение 20 мин на водяной бане или помещают в автоклав на 15 мин при давлении 0,5 - 1,0 кгс/см2, после чего охлаждают.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Охлажденную суспензию переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят pH до 6,8 - 7,0 добавлением 0,5 н. раствора едкого натра и 1 н. раствора соляной кислоты и доливают колбу бидистиллированной водой до метки.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Смесь фильтруют через бумажный фильтр и часть профильтрованного экстракта разбавляют водой до такой концентрации, чтобы в 1 см3 содержалось приблизительно 0,02 - 0,05 нг витамина .

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.2.7. Приготовление контрольной пробы

В исследуемой пробе может содержаться метионин, к которому чувствителен штамм E. coli 113-3, поэтому проводят контрольный анализ исследуемого экстракта, где витамин предварительно разрушают. Для этого 5 см3 экстракта смешивают с 5 см3 0,2 н. едкого натра и кипятят в течение 20 мин на водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения раствор нейтрализуют добавлением 1 н. соляной кислоты и разбавляют водой до такой же степени, как и в опыте с неразрушенным витамином .

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.2.8. Приготовление разведений исследуемого раствора кормового витамина 

Из исследуемой пробы готовят три разведения (в двух повторностях каждое), для чего в 6 пробирок (по две для каждого разведения) вносят по 5 см3 основной среды и следующие количества экстракта: 0,5; 1,0; 2,0 см3. Кроме того, готовят три разведения контрольного раствора. Для этого в три пробирки вносят по 5 см3 основной среды и следующие количества контрольного раствора: 3; 4; 5 см3. Затем объем содержимого каждой пробирки доводят до 10 см3 добавлением бидистиллированной воды.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.3. Проведение испытания

Испытание состоит из составления калибровочной кривой для чистого витамина и непосредственного испытания исследуемой пробы.

Пробирки с разведением стандартного и исследуемого растворов помещают в автоклав на 20 мин при давлении 1 кгс/см2, после чего охлаждают. Затем засевают каждую пробирку одной каплей бактериальной суспензии (приготовленной по п. 3.5.2.4) и ставят в термостат на 20 - 24 ч при температуре 37 °C.

По истечении указанного времени пробирки прогревают в автоклаве текучим паром 15 мин и охлаждают. После охлаждения содержимое пробирок взбалтывают и замеряют мутность на фотоэлектроколориметре или нефелометре. При использовании фотоэлектроколориметра замеры делают при синем светофильтре. Контрольным раствором для определения мутности является бидистиллированная вода.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

По полученным данным на миллиметровой бумаге строят калибровочный график. На оси ординат откладывают значение мутности для каждого стандартного разведения (среднее из трех пробирок), а на оси абсцисс - соответствующее количество витамина . При соединении полученных точек получают калибровочную линию.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

При незначительном разбросе точек калибровочную линию проводят между ними на расстоянии, равноудаленном от большинства точек.

(абзац введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.5.4. Обработка результатов

Содержание витамина определяют отдельно в каждой пробирке исследуемой пробы при помощи калибровочной линии. Данные, которые не укладываются в калибровочную линию, отбрасывают. По данным, которые уложились в линию (не менее двух разведений), определяют количество витамина в исследуемой пробе, затем вычисляют среднее арифметическое результатов двух разведений.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

Если наблюдается рост бактерий в контрольных пробирках, где витамин разрушен, то находят по калибровочному графику соответствующие росту значения, которые вычитают из найденного количества витамина в исследуемой пробе.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать 4,5 отн. %. Погрешность метода - +/- 15%.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.6. Определение безвредности

3.6.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

шприц медицинский инъекционный типа "Рекорд" по ГОСТ 18137-77;

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

ступку по ГОСТ 9147-73;

воду питьевую по ГОСТ 2874-73.

3.6.2. Проведение испытания

Для проведения испытания отбирают пять цыплят 6 - 8-недельного возраста массой по 400 - 600 г или пять белых мышей массой по 18 - 20 г. Кормовой витамин тщательно растирают в ступке с водой. Воду добавляют с таким расчетом, чтобы 1 см3 готовой суспензии содержал 100 мг препарата. Суспензию вводят цыплятам шприцем с тонким резиновым зондом через рот в течение пяти суток в дозе 8 - 12 см3 на каждого (из расчета 2 см3 на 100 г живой массы). Мышам взвесь вводят через рот с помощью иглы, на конец которой наплавлена олива диаметром не более 1 мм. Препарат вводят ежедневно в течение пяти суток в дозе 1 см3 на каждую мышь (из расчета 100 мг препарата на одну мышь).

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.6.3. Обработка результатов

Препарат считают безвредным, если все цыплята остаются живыми в течение пяти, а мыши в течение двух последующих суток наблюдения. При гибели части их проверку повторяют на удвоенном количестве цыплят и мышей. При гибели хотя бы одного цыпленка или мыши в повторном опыте препарат бракуют. Каждого цыпленка или мышь используют в опыте один раз.

3.7. Определение крупности частиц

3.7.1. Аппаратура

Для проведения испытания применяют:

рассев лабораторный с электрическим или ручным приводом с частотой вращения 180 - 200 об/мин;

сито лабораторное с сеткой из облегченной шелковой ткани N 27 по ГОСТ 4403-77;

весы технические I, II классов типов Т-1, Т-2.

3.7.2. Проведение испытания

50 г препарата, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, просеивают через сито в течение 8 мин. Затем слегка постукивают по обечайке сита и вновь просеивают в течение 2 мин. Для очистки сит при просеивании применяют 5 резиновых кружочков массой около 0,5 г каждый. Допускается просеивание ручным способом при 110 - 120 движениях в минуту и размахе колебаний сита около 10 см.

Остаток на сите взвешивают на технических весах с погрешностью не более 0,01 г.

3.7.3. Обработка результатов

Крупность частиц (остаток на сите) (X) в процентах вычисляют по формуле

где m - масса навески, г;

- масса остатка на сите, г.

Вычисление производят до 0,01%.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать 0,2 абс. %.

3.8. Определение числа микробных клеток

(п. 3.8 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.8.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы лабораторные рычажные 1-го или 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-80 или других аналогичных типов;

термостат типа ТС-80 или других аналогичных типов для поддержания температуры с отклонением +/- 0,2 °C от заданной;

лупу с увеличением в 8 - 10 раз;

прибор для подсчета колоний бактерий;

колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82 вместимостью 250 см3;

пипетки по ГОСТ 20292-74 4-го или 5-го исполнения, 1-го или 2-го класса точности, вместимостью 1 см3;

пробирки биологические по ГОСТ 25336-82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82 типа ЧБП, исполнения 2;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

агар микробиологический по ГОСТ 17206-71 или агар пищевой по ГОСТ 16280-70;

бульон мясо-пептонный по ГОСТ 20730-75;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(п. 3.8.1 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.8.2. Подготовка к испытанию

Мясо-пептонный агар готовят по ГОСТ 9225-68.

(п. 3.8.2 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.8.3. Проведение испытания

1 г препарата, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, помещают в колбу с 99 см3 стерильного физиологического раствора, получают разведение 1:100 и тщательно встряхивают. Из полученной взвеси готовят последующие разведения 1:1000 и 1:10000. После оседания взвешенных частиц из верхнего слоя жидкости берут суспензию каждого разведения и засевают на 2 - 3 чашки следующим образом:

1 см3 суспензии, взятый стерильной пипеткой, помещают в центр каждой чашки и заливают около 15 см3 расплавленного и охлажденного до 45 °C мясо-пептонного агара. При посеве и заливке агаром крышку чашки Петри быстро приоткрывают и закрывают. Сразу после заливки агара содержимое тщательно перемешивают, делая чашками круговые движения на гладкой поверхности стола, для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки переворачивают крышками вниз, помещают в термостат и выдерживают в течение 48 ч при температуре 37 °C.

(п. 3.8.3 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

3.8.4. Обработка результатов

Число выросших колоний подсчитывают в каждой чашке, поместив ее вверх дном (без крышки), пользуясь лупой и прибором для подсчета колоний. Каждую подсчитанную колонию отмечают на дне чашки чернилами. При большом числе колоний и равномерном их распределении дно чашки делят на 4 одинаковых сектора, подсчитывают число колоний в 2 - 3 секторах, находят среднее арифметическое и умножают на общее число секторов. Таким образом находят общее число колоний, выросших на одной чашке. Для подсчета общего числа микробных клеток в 1 г препарата число колоний, выросших на каждой чашке, умножают на соответствующее разведение.

Полученные результаты по отдельным чашкам складывают, делят на количество подсчитанных чашек и выводят среднее арифметическое, которое принимают за окончательный результат.

(п. 3.8.4 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

4.1. Кормовой витамин фасуют по 10, 12 и 15 кг с погрешностью не более 1,25% в мешки из полиэтиленовой пленки по ГОСТ 10354-73, которые затем запаивают и упаковывают в бумажные четырехслойные мешки марок НМ, ВМ, ПМ или ВМП по ГОСТ 2226-75.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

4.2. На каждый бумажный мешок наклеивают, пришивают или наносят трафаретом этикетку, содержащую данные об упакованной продукции:

наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак;

наименование препарата;

марку препарата;

массовую долю витамина ;

массу нетто;

номер партии;

дату изготовления;

назначение препарата;

норму ввода;

срок хранения;

условия хранения;

обозначение настоящего стандарта.

(п. 4.2 в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

4.2.1. Маркировка транспортной тары - по ГОСТ 14192-77 с нанесением манипуляционного знака "Боится сырости".

(п. 4.2.1 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

4.2.2. Витамин кормовой, предназначенный для экспорта, маркируют по ГОСТ 14192-77 и в соответствии с заказом-нарядом внешнеторгового объединения.

(п. 4.2.2 введен Изменением N 1, введенным Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

4.3. Транспортирование - по ГОСТ 23462-79.

(п. 4.3 в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

4.4. Хранение - по ГОСТ 23462-79.

(п. 4.4 в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

5.1. Изготовитель гарантирует соответствие кормового витамина требованиям настоящего стандарта при соблюдении потребителем условий применения и хранения.

(в ред. Изменения N 1, введенного Постановлением Госстандарта СССР от 20.07.1984 N 2565)

5.2. Гарантийный срок хранения кормового витамина - 1 год со дня изготовления.