"МУК 4.1.3568-19. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации (2R-цис)-4-амино-1-[2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-2(1н)-пиримидинона (ламивудин) в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 28.10.2019)

1. Подготовлены ФГБНУ "Научно-исследовательский институт медицины труда") (Л.Г. Макеева, Н.С. Горячев, Н.Л. Полуэктова, Е.Н. Грицун).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 18 октября 2019 г.

3. Введены впервые.

Разработаны сотрудниками ООО "Алгама" (Н.П. Сергеюк), АО "Всесоюзный научный центр по безопасности биологически активных веществ" (М.И. Голубева, Л.И. Крымова), ФГБНУ "Научно-исследовательский институт медицины труда им. академика Н.Ф. Измерова" (Л.Г. Макеева).

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 205-37/RA.RU.311787-2016/2017.

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода спектрофотометрии для измерений массовой концентрации ламивудина в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,3 - 1,8 мг/м³.

1.2. Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий Роспотребнадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научных и других организаций, осуществляющих исследования содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны.

1.3. Методические указания носят рекомендательный характер.

2.1. Физико-химические свойства ламивудина.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₈H₁₁N₃O₃S.

Молекулярная масса: 229,26.

Регистрационный номер CAS: 134678-17-4.

Ламивудин - белый или почти белый кристаллический порошок, температура плавления 177 °C, растворим в воде (70 мг/см³, трудно растворим в диметилсульфоксиде (20 мг/см³), малорастворим в метаноле и этаноле.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика ламивудина:

- противовирусный препарат группы нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ретровирусов, применяется при ВИЧ-инфекции;

- малоопасен при однократном поступлении внутрь, обладает общетоксическим действием при повторном поступлении.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации ламивудина метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

4.1. Измерение массовой концентрации ламивудина выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов ламивудина в смеси спирта этилового 96% и воды дистиллированной в соотношении (1:1) по объему поглощать УФ-излучение и измерении относительной оптической плотности полученных растворов.

Измерение производят при длине волны 271 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое содержание ламивудина в анализируемом объеме пробы - 30 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации ламивудина в воздухе - 0,3 мг/м³ (при отборе 100 дм³ воздуха).

Метод специфичен в условиях производства лекарственной формы, содержащей ламивудин. Определению не мешают вспомогательные вещества: лактозы моногидрат, целлюлоза микрокристаллическая, натрия кроскармеллоза, повидон, магния стеарат, спирт поливиниловый, макрогол, тальк, титана диоксид.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

Примечание. Допускается применение оборудования, вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами, по ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <1>.

--------------------------------

<1> ГН 2.2.5.3532-18 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны"; ГН 2.2.5.2308-07 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на спектрофотометре, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, контроль стабильности градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.2. Приготовление основного раствора ламивудина: основной раствор ламивудина с концентрацией 500 мкг/см³ готовят растворением 0,0500 +/- 0,0002 г ламивудина в смеси для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1) в мерной колбе вместимостью 100 см³. Срок хранения раствора - в течение суток в холодильнике.

9.3. Приготовление рабочего раствора ламивудина: рабочий раствор ламивудина с массовой концентрацией 100 мкг/см³ готовят разбавлением 10 см³ основного раствора ламивудина смесью для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1) в мерной колбе, вместимостью 50 см³. Срок хранения раствора - в течение суток в холодильнике.

9.4. Приготовление смеси для растворения: спирт этиловый 96%-й и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1).

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ наливают 500 см³ спирта этилового 96%, доводят водой дистиллированной до метки и перемешивают. Срок хранения раствора - в течение месяца в холодильнике.

9.5. Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.6. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость относительной оптической плотности раствора от содержания ламивудина, устанавливают по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии и контрольного раствора N 0 согласно табл. 2.

На аэрозольные фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 см³ наносят основной раствор ламивудина с массовой концентрацией 500 мкг/см³ и рабочий раствор ламивудина с массовой концентрацией 100 мкг/см³ в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и пипеткой вместимостью 5 см³ приливают по 5 см³ смеси для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1) и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в пробирки вместимостью 10 см³. Фильтры повторно обрабатывают 5 см³ смеси для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1), оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы объединяют в мерных пробирках вместимостью 10 см³ и доводят объем до 10 см³ смеси для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1). Аналогично обрабатывается чистый аэрозольный фильтр (контрольный раствор).

Относительную оптическую плотность полученных градуировочных растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 271 нм по отношению к контрольному раствору, не содержащему определяемого вещества (табл. 2, раствор N 0).

Строят градуировочную характеристику: на ось ординат наносят средние значения относительных оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им величины содержания ламивудина в мкг.

9.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в квартал, а также при смене реактивов и изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности готовят три градуировочных раствора по п. 9.3 (соответствующих началу, середине и концу диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой измерений.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

где D_изм, D_гр - значение относительной оптической плотности ламивудина в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике;

К_гр - норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение относительной оптической плотности этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика не стабильна, условие (1) не выполняется для двух или более образцов градуировочных растворов, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов (табл. 2) для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

9.8. Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005 и приложения 9 к Р 2.2.2006-05.

Одновременно отбирают две пробы. При отборе проб фиксируется температура воздуха и атмосферное давление.

Воздух с объемным расходом 10 дм³/мин аспирируют через аналитический аэрозольный фильтр с площадью рабочей поверхности 10 см², помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для измерения 1/2 ОБУВ ламивудина необходимо отобрать не менее 100 дм³ воздуха в течение 10 мин.

Срок хранения отобранных проб в бюксах - в течение трех дней в холодильнике.

10.1. Аэрозольный фильтр с отобранной пробой и чистый аэрозольный фильтр переносят в бюксы и с помощью пипетки вместимостью 5 см³ приливают по 5,0 см³ смеси для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1) и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в другие бюксы. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см³ смеси для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1), оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажные фильтры в мерные пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 см³. Объем растворов доводят до 10 см³ смесью для растворения: спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1).

Относительную оптическую плотность полученной анализируемой пробы измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 271 нм по отношению к контрольному раствору, полученному при обработке чистого аэрозольного фильтра.

Устанавливают содержание ламивудина (в мкг) в анализируемом объеме пробы по градуировочной характеристике (п. 9.6).

Примечание. Фильтрование растворов проб проводится для удаления нерастворимых в смеси для растворения - спирт этиловый 96% и вода дистиллированная с объемным соотношением (1:1) - вспомогательных веществ, входящих в состав лекарственных форм, содержащих ламивудин.

11.1. Массовую концентрацию ламивудина в воздухе рабочей зоны C, мг/м³, вычисляют по формуле:

где a - содержание ламивудина в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

V₂₀ - объем воздуха, отобранный для анализа (дм³), приведенный к стандартным условиям (прилож. 1 к настоящим методическим указаниям).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

где C₁, C₂ - результаты параллельных определений массовой концентрации ламивудина в воздухе рабочей зоны, мг/м³;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

12.1. Результат количественного химического анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м³;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация ламивудина менее 0,3 мг/м³ (более 1,8 мг/м³)".

Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

13.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сравнительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD_0,95 по формуле:

где C_ср1, C_ср2 - средние значения массовой концентрации ламивудина, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м³;

CD_0,95 - значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднее арифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в п. 5.3.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

При разногласиях руководствуются п. 5.3.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

13.2. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6, ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показатель правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре 293 К (20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.):

где V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, дм³;

P - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (прилож. 2 к настоящим методическим указаниям). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.